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蜡样芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及重组酶性质
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蜡样芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达及重组酶性质
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环凯显色培养基
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蜡样芽孢杆菌显色培养基
商品类别：环凯显色培养基
货 号 ：CRM005
价 格 ：您还不是会员登录
规 格 ：1000ml
浏览次数：3236次
添加日期：
　　蜡样芽孢杆菌显色培养基
　　(Chromogenic Bacillus Cereus Agar )
　　用　　途：
　　蜡样芽孢杆菌显色培养基用于食品样本中蜡样芽孢杆菌的快速分离和鉴定。
　　原 理：
　　蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与蜡样芽孢杆菌酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上蜡样芽孢杆菌产生绿~蓝绿色的菌落。
　　蜡样芽孢杆菌显色培养基配方(每升)：
蛋白胨&&&&
磷酸氢二钠
磷酸二氢钾
　　最终pH 7.2&0.2
　　使用方法：
　　1、取瓶内蜡样芽孢杆菌显色培养基40克，用1000ml蒸馏水或纯水溶解，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃15min高压灭菌，冷至50℃，每瓶添加剂(SR0210)中加入1ml无菌水，使之完全溶解，然后加入100毫升培养基中，混匀，倾注灭菌平皿。
　　2、用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液配制10-1~10-5的样本稀释液按GB/T 4789.2测定。
　　3、取各稀释液0.1ml接种至蜡样芽孢杆菌显色琼脂平板上涂布或划线。
　　4、37℃培养24小时，选取适当菌落数的平板进行计数。
　　5、通过验证试验进一步确认假定性蜡样芽孢杆菌，如氧化酶、革兰氏染色等。
　　6、报告每克(毫升)食品样本中蜡样芽孢杆菌的数目。
　　质量控制：
　　本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后于36&1℃培养18~24h生长情况如下表:
　　贮 存：旋紧瓶盖，贮存于10-30℃、避光、干燥处。贮存期二年。
　　规 格：可配置1L的培养基干粉。　　推荐期刊投稿
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&&&浏览历史蜡样芽孢杆菌ColR75E胶原酶的表达、纯化及酶学性质研究--《中国生物工程杂志》2015年10期
蜡样芽孢杆菌ColR75E胶原酶的表达、纯化及酶学性质研究
【摘要】：目的:为了进一步了解蜡样芽孢杆菌R75E胶原酶colR75E的特性,在大肠杆菌原核表达系统中表达colR75E胶原酶,并对表达的重组胶原酶进行纯化以及酶学性质研究。方法:以蜡样芽孢杆菌R75E基因组DNA为模板采用PCR法获得胶原酶colR75E基因,构建pET28a/colR75E重组质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,利用Ni-NTA纯化的方式获得高纯度ColR75E胶原酶,利用胶原酶谱、胶原酶活力测定、Ⅰ型胶原蛋白降解产物电泳检测等方式对ColR75E胶原酶的酶学特性进行分析。结果:通过Ni-NTA纯化获得的蛋白经胶原酶谱、Ⅰ型胶原蛋白降解产物的检测时均表现出胶原蛋白的降解能力。在标准条件下测得其比活力为3.62 U/mg,Km为25.55μmol/L(2.93 mg/ml),Vmax为5.71μmol/(mg·min)。ColR75E胶原酶的最适反应温度为45℃,最佳反应p H为8.0。此外,ColR75E胶原酶对于不高于50℃的温度以及pH6.0~8.0的酸碱度范围具有良好的稳定性。ColR75E胶原酶可被Ca2+激活、但被Zn2+、Pb2+、Fe2+、Mn2+等金属离子抑制,抑制能力依次为Pb2+Zn2+Fe2+Mn2+。ColR75E胶原酶对EDTA和EGTA的高敏感性进一步证实了该胶原酶为一种金属蛋白酶。结论:利用大肠杆菌原核表达系统获得高纯度高活性的蜡样芽孢杆菌胶原酶是可行的,为该胶原酶广泛应用于医疗、食品等工业领域中奠定了理论基础。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q936【正文快照】：
胶原酶(Collagenase)指的是在天然p H与温度条件下可以降解胶原纤维的一类蛋白酶[1-2]。胶原酶来源广泛,多种微生物、动物的许多组织细胞都可产生胶原酶,根据来源可主要分为微生物胶原酶与动物胶原酶[3]。其中,微生物胶原酶以底物范围广、酶切位点多、生产成本低等优点应用更
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【参考文献】
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【共引文献】
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杨建,杜宁,奚小冰,王毓兴,王力,顾宏;[J];国外医药(合成药 生化药 制剂分册);2000年02期
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