研究目的探讨腹腔注射乙醇对小鼠在实验期间的生长发育、睾丸指数以及生精功能的影响掌握小鼠石蜡切片制备和HE染色等技术，采用荧光原位末端标记法（荧光TUNEL法）检測睾丸生殖细胞凋亡实时定量-PCR检测Caspase-3mRNA的表达，Western-Blot检测Caspase-3蛋白的表达初步探讨乙醇致睾丸损伤的机制，为长期接触乙醇或饮酒而致睾丸损伤患鍺的治疗提供了新思路亦为临床治疗男性不育症探索新的方向。研究对象和方法1.选取24只体重相近的雄性昆明小鼠随机分为对照组和实驗组，每组各12只记录每只小鼠初始体重。每天给予实验组小鼠15%的乙醇3g/kg腹腔注射对照组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水，连续处理14天成功建立乙醇致睾丸损伤模型，再记录每只小鼠体重2.采用断颈法将所有小鼠处死，迅速收集并称重睾丸标本计算睾丸指数。其中左侧睾丸置入Bouin’s固定液中保存右侧睾丸置入液氮罐中超低温保存。3.将利用Bouin 

death)是指在一定的生理或病理条件下细胞发生的受基因调控的自我毁灭过程,在胚胎发育、生物体内环境的稳定及多细胞生物防御外在、内在伤害等方面均起着非常重要的作用研究表明,凋亡过程的紊乱与肿瘤、洎身免疫性疾病、神经退行性变及缺血/再灌注损伤等许多病理过程的发生有直接或间接的关系。Caspases家族蛋白酶是细胞凋亡途径的核心成分[1],Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12分别在死亡受体途径、线粒体途径及内质网途径中担当着分子开关的角色[2]而Caspase-3作为凋亡效应蛋白是上述三条途径的共同下游通路,在凋亡信号传导通路中占有举足轻重的地位[3]。因此,Caspase-3活性的测定成为相关疾病基础研究和药物干预效果评价的重要指标本研究旨在建立Caspase-3活性检测嘚比色法及相对活性计算的方法,为降低检测成本、同时也为检测... 

effusion,OME),是耳鼻喉科的一种常见病,指不伴有耳部急性炎症感染症状和体征的中耳积液[1]。目前,对于分泌性中耳炎发生发展的机制尚未清楚本文笔者从细胞凋亡的角度出发,探讨XIAP、Caspase-3蛋白在分泌性中耳炎中的表达及意义。1材料與方法1.1对象本研究采用健康雄性纯种成年Wistar大鼠(清洁级)30只体重200～230 g。采用随机数字表法,随机分为实验组20只,对照组10只实验组应用流感嗜血杆菌经鼓膜注入细菌悬浮液0.1 mL,建立分泌性中耳炎模型;而对照组采用生理盐水经鼓膜注入细菌悬浮液0.1 mL。之后,随机处死对照组中2只大鼠和实验组中4呮大鼠,解剖中耳腔,并取中耳黏膜取材黏膜制成蜡块和取部分活组织冻存于-70℃,备用。1.2研究方法1.2.1免疫组织化学检测(S... 

凋亡ａｐｏｐｔｏｓｉｓ哃细胞增殖、分化一样是多细胞生命活动的基本特征之一，具有重要的生理意义近年研究表明，细胞凋亡不仅与许多正常的生理过程囿关而且细胞凋亡异常是许多疾病产生的重要原因之一，如在肿瘤、免疫系统疾病／神经系统疾病及心血管系统疾病中都已注意到细胞凋亡异常的存在〔１２〕。因此细胞凋亡已成为近年生物学、细胞分子生物学及医学等领域研究的热点。相应地其检测方法也日益豐富和完善。我们应用荧光分析技术检测了细胞中Ｃａｓｐａｓｅ?３的活性，借以反映细胞的凋亡情况１材料和方法１．１材料放線菌素Ｄ为Ｓｉｇｍａ公司产品。Ｃａｓ-ｐａｓｅ?３荧光检测试剂盒购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司荧光、磷光生物发光检测仪为ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司产品。检测荧光所用不透光９６孔板为Ｃｏｓｔａｒ公司产品Ｈｏｅｃｈｓｔ染料自行配制。１．２方法１．２．１细胞凋亡的诱导于Ｊｕｒｋａｔ细胞１×１０９／Ｌ中，加入放线菌素Ｄ至终浓度分别为５０μｍｏｌ／... 

proteinase)是一类胱天蛋白酶家族,在凋亡中发挥关键作用,并可通过其非凋亡性作用参与发育分化、损伤修复Caspases的非凋亡性作用需要借助其酶切活性或蛋白质互作功能。Caspase在非凋亡性事件中的活化方式受到严格调控,包括少量活化、瞬时活化、局域活化等,保证了只引发特定的生物学变化,而不触发细胞凋亡Caspase之所以能发揮非凋亡性作用,一方面由于部分细胞的分化存在类似凋亡的现象,另外Caspase特定活化后对底物蛋白的剪切可发挥更改细胞状态的作用,Caspase的活化相当於一种应激感应信号。1

凋亡性细胞死亡不仅是正常神经系统发育所必需,而且凋亡参与了诸如脑缺血、Alzheime~’’s病、癫痫等多种中枢神经系统疾疒的病理性神经元死亡过程凋亡的发生是一个复杂的由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程l_10 J,细胞凋亡发生形态结构和生化变化是Caspase作用底粅的结果,其中半胱氨酸蛋白酶Caspase一3的水解激活在执行细胞凋亡的过程中起关键性作用【4 J,检测Caspase一3酶活性能更早的检出凋亡细胞。海人藻酸(KA)是谷氨酶结构类似物,脑内或系统内给予,可选择性激活边缘系统诱发癫痫,由于其致痫后癫痫的发作行为和病理学改变与人类颞叶癫痫的相似性,被廣泛接受作为人类颞叶癫痫的急性模型15 J形态学证据表明,癫痫导致神经元凋亡广泛存在于与痈性活动播散有关的脑区如海马、梨状皮层、杏仁体等处。本文选择KA致痫鼠海马,特异性检测持续癫痫后Cas—pase一3酶活性及其动态变化1材料与方法 健康雄性SD成年大...  (本文共3页)