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如题，如何将编码某个基因的开放阅读框按正确的阅读框到真核表达载体pCMV-Tag2B上，本人菜鸟一枚，谢谢大家了，我邮箱:
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有没有人能帮帮我咯
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murongxiaoxiao大叔级摄影爱好者，喜欢分享绝对零度积极有责任心，热心公益事业yiii红米达人，爱拍照的北京女孩[转载]如何研究转录因子对基因的影响
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|系统分类:|文章来源:转载
先到NCBI上找到转录因子的基因全长CDS编码框，构建真核表达载体，用引物在不同细胞系的CDNA文库中跑一下PCR，最好转入到不表达这个转录因子的细胞中（如果都表达，那作个过表达也有参考价值），检测并确定其可以表达，同样将受其调控的基因构建成真核表达载体，一组与转录因子真和表达载体一起转到这个特定的细胞中去，另一组只转入受其调控的基因构建成真核表达载体，还有一组什么都不转做空白，分别提取RNA，做荧光定量PCR检测表达量差异，如果结果好的话下一步可以做emsa，进一步证明此转录因子在目的基因的promoter上的结合情况。做酵母单杂EMSA看基因上游序列会不会和这个转录因子结合，瞬转western检测你目地基因的表达水平看基因上调还是下调将被调控基因的promoter连到报告基因上检测转录因子是否影响启动子活性对于预测特定结合位点的确定可以做emsa 或对报告质粒做突变可用wb在蛋白水平上检测；rt在mRNA水平上检测检测时转录因子可以过表达和RNAi可用chIP获得内源非artificial的证据&
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第六章I_目的基因与载体的连接
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第六章I_目的基因与载体的连接
官方公共微信载体pCAMBIA-1302的构建表达问题(载体,开放阅读框,目的基因,酶切) - DNA技术 - 生物秀
标题: 载体pCAMBIA-1302的构建表达问题(载体,开放阅读框,目的基因,酶切)
摘要: [载体pCAMBIA-1302的构建表达问题(载体,开放阅读框,目的基因,酶切)] ???? 如下图的所示，我将目的基因的开放阅读框酶切进入Xba Ⅰ 和Kpn Ⅰ 之间，但是没有加入启动子，就只是切进去在两个35S之间，那么他可以表达吗？但是第二张图谱显示在酶切位点的前面有lacZ promoter，这是什么情况？是不是说，他是可以表达的？请高手解答。。 关键词:[载体 目的基因 开放阅读框 酶切 酶切位点 图谱 启动子]……
???? 如下图的所示，我将目的基因的开放阅读框酶切进入Xba Ⅰ 和Kpn Ⅰ 之间，但是没有加入启动子，就只是切进去在两个35S之间，那么他可以表达吗？但是第二张图谱显示在酶切位点的前面有lacZ promoter，这是什么情况？是不是说，他是可以表达的？请高手解答。。
回复顶一个，对这个质粒不了解，但是感觉很奇怪，MCS怎么在两个CAMV promoter 的外面呢，目的基因不是应该在启动子之后才能表达蛋白么？有做过这方便的高手请过来帮帮忙
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什么方法确定插入目的片段后表达载体的阅读框有无发生变化？
本人新手，用PGEX-6P-1表达一段基因，上游Sal 1酶切位点，下游Not 1酶切位点，请问一般是什么办法来看我插入目的片段后，重组载体的阅读框是否发生变化呢？是有专门的软件分析还是怎么办？一直被这个问题困扰。麻烦给出可以分析的软件或在线预测的网站，菜鸟不胜感激！
我现在在设计引物，考虑到如果选的这两个酶切位点会引起目的基因读码框移位，我就直接在引物中目的基因前加1~2个碱基来确保读码框正确。所以现在正在纠结不知道该怎么判断读码框是否移位，求助！
唉，没办法，其他酶都用不了。我已学会判断方法，感谢您的指导，金币送上~~
前辈,我不会看,能帮我看看吗?pet-28a,BamHI和HindIII.
不会移码，但是你的基因前面带了很长一段多肽，不知道对你的酶会不会有影响
请问前辈是怎么看的?不需要用到目的基因吗?我的酶切位点前面加了2-3个保护碱基:CG GGATCC CG& &BamHI
& && && && & CCC AAGCTT GGG& &HindIII
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