大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌检测方法_化工_中国百科网
大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌检测方法
    
&&&&&&& 大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌/，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。&&&&&&&& 大肠杆菌/的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂 。于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。和材料1.水浴箱：44.5&0.2℃，水浴箱中的水应高于试管中的培养基液面。2.插入型温度计：1-55℃，大约长55cm，精度为0.1℃，必须经NIST或相关部门检测合格3.培养箱：35&1.0℃4.电子天平：感量0.1g，称量范围大于2Kg5.均质器或均质瓶（见第1章）6.无菌吸管：1.0ml和10.0ml7.无菌器皿：（用于样品处理）8.无菌稀释用带盖玻璃瓶9.菌落计数器或同等产品10.长波紫外灯:（-365nm）不超过6w11.PH计培养基和试剂煌绿乳糖胆盐肉汤，2% （M25）LST肉汤（M76）EC肉汤（M49）L-EMB琼脂（M80）胰蛋白胨（色氨酸）肉汤（M164）MR-VP肉汤（M104）Koser枸橼酸盐肉汤（M72）PCA（标准方法）（M124）Butterfield`s磷酸盐缓冲液（R11）或同等稀释液（贝类除外）Kovacs`试剂（R38）V-P试剂（R89）革兰氏染色液（R32）甲基红指示剂（R44）结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）（M174）VRBA-MUG琼脂（M175）EC-MUG培养基（M50）LST-MUG肉汤（M77）0.1%蛋白胨水稀释液（R56）MPN法&用于大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数称取50g样品加入高速捣碎杯中，见第1章或现在FDA器械 。冷冻样品在2-5℃解冻（&18h），但不要融化。加入450ml 磷酸盐缓冲液，搅拌2分钟，如果样品量小于50g，称取一半样品加入足够体积的无菌稀释液，制成1：10的样品液，在捣碎杯中的液体应完全覆盖刀片。稀释倍数根据大肠菌群对样品的污染情况，用稀释液将样品制成一系列十倍递增的样品稀释液，以30cm幅度于7s内将样品振摇25次（或以器械振摇器震荡）。选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种3管LST，每管接种1ml，以一定的角度，使吸管的尖部在试管壁上停留2-3s，从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不要超过15min。（注意：用5管MPN法检测贝类食品和贝类养殖水）将接种的LST管放置35℃培养，检查和记录在24&2h时倒管内产气的试管，未产气的试管继续培养24h，在48&2h时检查和记录产气情况，对所有产气的试管进行确证试验。MPN法&大肠菌群确证试验将所有LST肉汤产气管，用接种环接种一环到煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤中。置BGLB试管于35℃培养48&2h，记录所有BGLB肉汤管的产气管数。按BGLB肉汤产气管数，查MPN表（见附录2 ），计数出大肠杆菌的最可能数值。MPN法&粪大肠菌群和大肠杆菌确证试验从产气LST肉汤管中接种一环培养物到EC肉汤管中（木制接种棒也可以使用）。将所有接种的EC肉汤管放入带盖水浴箱中，45.5℃培养24&2h，检查产气情况。如果不产气，继续培养至48&2h，检查产气情况。按产气管数，查MPN表计数出粪大肠菌群MPN值。继续大肠杆菌/分析，按以下F部分进行。EC肉汤MPN方法可用于海水和贝肉类的粪大肠菌群检测。注意：除水、贝类和贝类养殖水中的粪大肠菌群检测的培养温度为44.5&0.2℃外，其他所有食品中粪大肠菌群的培养温度为45.5&0.2℃。MPN法&大肠杆菌的完全测定进行大肠杆菌完全测定前，轻轻摇匀产气的EC肉汤试管，取产气管的培养物划线接种于伊红美蓝平板（L-EMB），35℃培养18-24h，检查L-EMB平板上有无具黑色中心的有金属光泽或无金属光泽的扁平菌落。挑取5个典型菌落接种到PCA斜面培养基上，35℃培养18-24h，进行进一步检测。&
收录时间:日 09:16:40 来源:中国化工机械设备网 作者:匿名
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标题: 大肠菌群的定义及测定意义(粪便,食品,大肠杆菌,细菌)
摘要: [大肠菌群的定义及测定意义(粪便,食品,大肠杆菌,细菌)] (一)大肠菌群的定义及范围 根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸 [关键词:粪便 食品 大肠杆菌 细菌 病原菌 致病菌 非典型 肠杆菌科]……
(一)大肠菌群的定义及范围
根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。
由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利用四个生化反应分别为“十十一一”，通常称为典型大肠杆菌(Escherichia coli)；而其他类大肠杆菌(Escherichia coli)则披称为非典型大肠杆菌(Escherichia coli)。
(二)大肠菌群的测定意义
粪便污染的指标细菌 早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)氏首先提出大肠杆菌(Escherichia coli)作为水源中病原菌污染的指标菌的意见，因为大肠杆菌(Escherichia coli)是存在于人和动物的肠道内的常见细菌。一年后，塞乌博耳德“斯密斯(Theobold．Smith)氏指出，大肠杆菌(Escherichia coli)因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于人或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应用大肠杆菌(Escherichia coli)作为水源中粪便污染的指标菌。据研究发现，成人粪便中的大肠菌群的含量为：108个／g一109个／g。若水中或食品中发现有大肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。根据这个理由，就可以认为这种含有大肠菌群的水或食品供食用是不安全的。所以目前为评定食品的卫生质量而进行检验时，也都采用大肠菌群或大肠杆菌(Escherichia coli)作为粪便污染的指标细菌。当然，有粪便污染，不一定就有肠道病原菌存在，但即使无病原菌，只要被粪便污染的水或食品，也是不卫生的，不受人喜欢的。
2．粪便污染指标菌的选择 作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下几个特性，才能起到比较正确的指标作用。 ①存在于肠道内持有的细菌，才能显示出指标的特异性。 ⑧在肠道内占有极高的数量，即使被高度稀释后，也能被检出。 ⑧在肠道以外的环境中，其抵抗力大于肠道致病菌或相似，进入水中不再繁殖。 ④检验方法简便，易于检出和计数。
在食品卫生微检验中，可作为粪便污染指标菌依据的上述条件，粪便中数量最多的是大肠菌群，而且大肠菌群随粪便排出体外后，其存活时间与肠道主要致病菌大致相似，在检验方法上，也以大肠菌群的检验计数简便易行。因此，我国选用大肠菌群作为粪便污染指标菌是比较适宜的。
另外，作为粪便污染的指标细菌还有：分叉杆菌(Bifidobacterium)、拟杆菌(Bacteroides)、乳酸菌、肠杆菌科中的梭状芽胞和底群链球菌等，据报道，拟杆菌是人体肠道内第二个较大的菌群；厌气性乳酸菌占人体肠道内细菌组分的50 ％以上，一般粪便中该菌量为109个／g—1010个／g。肠道内属于肠杆菌科的细菌，除上述的细菌外，还有克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌和副(Escherichia coli)等，也可以充当粪便污染指标菌。很多研究者认为，在冷踪食品或冷冻状态照射处理过的食品中，(Escherichia coli)可比其他多种病原菌容易死亡，因此，像这类食品，用大肠菌群作为指标菌就不够理想，而底群链球菌对低温抵抗力强，作为这类食品的粪便污染指标菌就比较适宜。上述的这些肠道内的其他细菌，虽与粪便有关，因均比不上大肠菌群所具备的指标特异性，所以目前还没有列入作为公认的粪便污染的指标细菌。
当然，大肠菌群作为粪便污染指标菌也有一些不足之处： ①饮用水中含有较少量大肠菌群的情况下，有时仍能引起肠道传染病的流行。 ⑧大肠菌群在一定条件下能在水中生长繁殖。 ②在外界环境中，有的沙门氏菌比大肠菌群更有耐受力。
3．大肠菌群作为粪便污染指标菌的意义 粪便污染的食品，往往是肠道传染病发生的主要原因，因此检查食品中有无肠道菌，这对控制肠道传染病的发生和流行，具有十分重要的意义。
许多研究者的调查证明，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。在腹泻患者所排粪便中，非典型大肠杆菌(Escherichia coli)常有增多趋势，这可能与机体肠道发生紊乱，大肠菌群在型别组成的比例上因而发生改变所致；随粪便排至外环境中的典型大肠杆菌(Escherichia coli)，也可因条件的改变。使生化性状发生变异，因而转变为非典型大肠杆菌(Escherichia coli)。由此看来，大肠菌群无论；庄粪便内还是在外环境中，都是作为一个整体而存在的，它的菌型组成往往是多种的，只是在比例上，因条件不同而有差异。因此，大肠菌群的检出，不仅反映校样被粪便污染总的情况，而且在一定程度上也反映了食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况，所以具有广泛的卫生学意义。
由于大肠菌群作为粪便污染指标菌而被列入食品卫生微生物学常规检验项目，如果食品中大肠菌群超过规定的限量，则表示该食品有被粪便污染的可能，而粪便如果是来自肠道致病菌者或者腹泻患者，该食品即有可能污染肠道致病菌。所以，凡是大肠菌群数超过规定限量的食品，即可确定其卫生学上是不合格的，该食品食用是不安全的。
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& && & 本标准规定了测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群的纸片快速法。
& && & 本标准适用于地表水、废水中总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。
& && & 本方法的检出限为20 MPN/L。
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学习了，很好，大肠菌是很重要的，对人体健康很重要。
好！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！
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