当前位置： >> 彩鲫Ran基因全长cDNA的克隆及其组织表达特异性分析 维普资讯 动物学研究２ ０ ，Ｊ ｎ．２ （ ） ７ ０３ ｕ ４ ３ ：１３―１ ９ ７　Ｚｏｏ ｏ ｉａｌＲｅ ｅ ｃ ｌ ｇ ｃ 　 ｓ ａｒ ｈ　
彩 鲫 Ｒ ｎ基 因全 长 ｃ ＮＡ 的 克 隆 及 其 组 织 表 达 特 异 性 分 析　 ａ Ｄ李 常健 ，刘　 军 ，石耀 华 ，杨书婷 ，桂 建芳　（ 中国科学 院水生生物研究所 ，淡水生 态与生物技术国家重点实验 室 ，湖北 武汉 ４ｏ７ ） ３０ ２　摘 要 ：根 据 Ｒ ｎ的保守 区序列 设 计 简并 引 物 ，结 合 Ｓ Ｒ 　Ｄ Ａ合成 及 Ｒ ＥＰ Ｒ技 术 ，克 隆 到彩 鲫　 ａ ＭＡ Ｔ ｃ Ｎ ＡＣ ．Ｃ （ ａａｓ ｓａ ｒｔｓｃｌ 　ａ ｅ ）的 Ｒ ｎ基 因的 ｃ Ｎ Ｃ ｒｓｉ 　ｕａｕ ｏ ｒ ｒ ｔ ｕ 　 ｏ ｖｉ ｙ ａ Ｄ Ａ全 长 ，其编 码 区全长 为 ６ ８ｂ ，编码 ２５个 氨 基酸 。采用　 ４ 　ｐ １ Ｂ Ａ Ｔ程序 在 Ｎ Ｂ 数 据库中对其进行 同源基因搜索 ，结 果表 明 ，其推 测 的编码 氨基 酸序列 与斑 马鱼 和鲑 鱼 的　 ＬＳ ＣＩ Ｒ ｎ基 因编码的氨基 酸序列 的同源性 分别高达 ９ ％和 ９ ％。还对其编码 区全长序列进行 了原核表达 ，以经纯化　 ａ ８ ７ 的表达蛋 白免疫 家兔 ，制备 出了具有 较高特异性 的多克 隆抗 体 。采用 Ｗｅｔ ｎｂｏ ｉｇ进行 的组织特 异性分 析表　 ｓ ｒ　 ｌｔ ｅ ｔｎ 明，Ｒ ｎ蛋 白在卵巢 、精巢 和肾中表达 ，在心 、脑 、肝 、脾 和肌 肉中不 表达 。本 工作 为采 用免 疫耗 竭法 、免疫　 ａ 共沉 淀 、体外系统模拟 等方法进一步 研究鱼类 Ｒ ｎ基 因的生理 功能及分离 鉴定其结合蛋 白提供 了良好 基础。 ａ 　关 键 词 ： 彩 鲫 ； Ｒ ｎ；克 隆 ；表 达 ；抗 体 　 ａ 中 图 分 类 号 ：Ｑ ５ ．６ 　 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ５ ９９４８ 　 ２ ４―５ ５ （０ ３ ０ ―０ ７ ―０ 　 ８ ３ ２ ０ ）３ １ ３ ７Ｆｕ ｌＬｅ ｇ ｈ ｃ ｌ 　 ｎ ｔ 　 ＤＮＡ　 ｏ ｎ 　 ｎ 　 ｓ ｕ 　 ｐ ｅ ｓｏ 　 Ｃｌ ｎｉ ｇ ａ ｄ Ｔｉｓ ｅ Ｅｘ ｒ ｓｉ ｎ Ｓ ｃｆｃ ｔ 　 ｆ Ｒａ 　Ｇｅ 　ｎ Ｃｏ ｏ 　 ｕｃａ 　 ｒ 　 ｐｅ ｉ ｉｙ ｏ 　 ｎ ｉ ｎｅ ｉ 　 ｌ ｒ Ｃｒ ｉ ｎ Ｃａ ｐＬ Ｃ ａ ｇｊ ｎ，ＬＵ Ｊ ｎ Ｈ　 ａ ―ｕ ，Ｙ Ｇ Ｓ ｕｔ ｇ Ｉ ｈ ｎ ―ａ 　 ｉ Ｉ　 ｕ ，Ｓ Ｉ ｏｈ ａ ＡＮ 　 ｈ ―ｎ ，ＧＵＩ ｉｎｆｎ 　 Ｙ ｉ 　 ａ― ｇ Ｊ ａ（ 衄　ＫｙＬ ｂｒｔｒ　 ｒ ｈ ａｅ Ｅ ｏ ｇ　ｎ 　 ｉｅｈ ｏｏｙ，Ｉｓｉ ｔ ｏ Ｈｙｒｂ ｌ ｙ　 ｓ ｅ　ａ ｏａｏｙｏ ｅ ｗ ｔｒ ｃｌ ｙａ ｄＢｏ ｃｎ ｌ ｆＦ ｓ 　 ｏ ｔ ｇ ｎｔｕｅｆ ｄｏｉｏ ． ｔ 　 ｏｇｔｅＣ ｉ ｓ ｃｄｍｙｏ Ｓｉｎｅ ， Ｗｕ ａ　 ４ ０ ７ ， Ｃ ｉ 　 ｈ　 ｈｎ ｅＡａ ｅ ｆ ｃ ｃｓ ｅ ｅ ｈｎ ３０２ ｈｎ ａ）Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ａ　ｕｌｌｎ ｔ　ＤＮＡ　ｆＲａ 　 ｅ ｅｗ ｓｃｏ ｅ　ｒｍ　 ｏｏ　ｒｃａ 　ａｐ（ ａ ａｓｕ　 ｕａｕ　 ｏｏ　ａｉｔ ｆｌ ｅ ｇｈ ｃ － ｏ　 ｎｇ ｎ 　 ａ　 ｌｎ ｄ ｆ ｏ ｃ ｌｒｃｕ ｉｎｃ ｒ Ｃ ｒｓｉｓａ ｒｔｓｃ ｌｒｖ ｒｅ ｙ）ｂ 　 ｙｕ ｉｇＳ ｓ 　 ＭＡＲＴ ｃ ｎ 　 ＤＮＡ　ｙ ｔ ｅ ｉ　 ｎ 　 ｓ ｎｈ ｓｓａ ｄ ＲＡＣ ． Ｒ ｗｉ 　 　 ａ ｒｏ 　 ｅ ｅ ｅａ ｅ ｐ ｍｅ ｓ ｄ ｓ ｎ ｄ ａ ｃ ｒ ｉ ｇ ｔ　ｈ 　 ｏ ｓ ｒ ｅ 　ｅ 　 Ｅ ＰＣ 　 ｔ ａ ｐ ｉ ｆｄ ｇ ｎ ｒ ｔ　 ｒ ｒ　 ｅ ｉ ｅ 　 ｃ ｏ ｄ ｎ 　 ｏ ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｖ ｄ ｒ ． ｈ 　 ｉ ｇｏ 　 ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ 　 ａ 　 ｅ ｅ．Ｔｈ 　 ａ 　 ＤＮＡ ｗ ｓ ｆ ｕ ｄ ｔ　 ｅ １０ 　 ｐ ｉ 　ｅ ｇｈ ｗｉ ｌａ ６ 　 ｐ ５ Ｕ Ｒ　 ｎ 　 　 ６ 　 ｐ ３’ ｎ ｓｑ ｅ ｃ 　ｆＲ ｎ ｇ ｎ ｅＲ ｎ ｃ 　 ａ 　 ｏ ｎ 　ｏ ｂ 　 　 ８１ ｂ 　 ｎ ｌｎ ｔ　 ｔ 　 　 ７ ｂ 　 ’ Ｔ ａ ｄ ａ ３ ６ ｂ 　 　 ｝ Ｕ　 ｒ Ｒ． Ｔｈ 　 ｏ ｉ ｇ ｒ ｇｏ 　ｎ ｌ ｄ ｄ ６ ８ ｎ ｃ ｅ ｔ ｅａ ｉ ｓ ａ ｄ ｅ ｃ ｅ 　 １ 　 ｍｉ ｏ ａ ｉ ｓ Ｓ ａ ｃ ｉ ｇｈ ｍｏ ｏ ｏ ｓｇ ｎ ｓ ｂ 　 ｓ　 ｅ ｃ ｄ ｎ 　ｅ ｉ ｎ ｉ ｃｕ ｅ 　 　 ｕ ｌｏ ｉ 　 ｃ ｄ 　 ｎ 　 ｎ ｏ ｄ ２ ５ ａ ｎ 　 ｃｄ ． ｅ ｒ ｈ ｎ 　 ｏ ｌｇ ｕ 　 ｅ ｅ 　 ｙ ｕ － ４ ｄ ｄｉ ｇ ｔ ｉ　 ｕ ｌｏ ｉ ｅｓ ｑ ｅ ｃ 　ｎ ＮＣＢ 　 ａａ ａ ｅ ｓ ｏ ｅ 　ｈ ｔ ｈ 　 ｅ ｕ ｅ 　 ｍｉｏ ａ ｉ ｓｓ ｑ ｅ ｃ 　 ｆＲａ 　 ｅ ｅｏ 　ｏ ｏ 　 ｒ ｃａ 　 ｎ 　 ｓｎ ｃｅ ｔ 　 ｅ ｕ ｎ ｅ ｉ　 ｈ ｄ Ｉｄ ｔｂ ｓ 　ｈ ｗ ｄ ｔ ａ　 ｅ ｄ ｄ ｃ ｄ ａ ｎ 　 ｃ ｄ 　 ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ　 ｎ ｇ ｎ 　 ｆｃ ｌ ｒ ｕ ｉｎ ｔ ｃｃｒ　ｈ ｅ　ｉ 　 ｅｔｙｗｔ　 ａ 　ｅ ｅ ｏ　 ａｏｒ ｉ （８ ）ａｄＳ ｌ ｏｓｌｒ（ ７ ） ａｐｓａ ｄｈｓ ｉ ｎｉ 　ｉ Ｒ ｎｇｎ ｓ ｆＤ ｎ　 ｒ ９ ％ ｎ 　 ａｍ 　 ａ ９ ％ ．Ｍ ｒｏｅ 。ｔｅｆ １ｅ ｇ 　ｅ　 ｒ ｈｄ ｔ ｈ 　 ｅｏ ａ ｏｅｖｒ ｈ 　 ｌ １ ｔ ｓ． ｕ ．ｎ ｈ ｑ ｅｃ　ｆｔ ｃ ｉ 　ｅ ｏ　 ａ　ｘｒｓｅ　 　 ｃｌ Ｄ ３ ．Ｔ　ｃｕｒ　 ｌｃ ｎ 　ｎｉｏｙ ｈｅｅｐｅｓｄｐｏ ｉ ｗ 　 ｕ ｎｅｏ　ｓ ｏ ｎ ｒｇ ｎｗ ｅｐｅｓｄｉ Ｅ．ｏｉ（ Ｅ ） ０ａｑ ｉ ｍｕｔ ｌ ａ ａ ｔ ｄ ，ｔ 　ｘｒｓｅ　ｒｔ ｎ ａ ｉ　ｄ ｇ ｉ ｓ ｎ ｅ ｉ ｏｌ ｂ ｅ 　ｓｐ ｒ ｅ 　 ｄ ａ ｐ ｉｄ ｔ　ｍｍｕ ｉ 　 ａ ｂ ｔ ． Ｗ ｅ ｔ ｒ 　 ｌｔ ｎ 　ｅ ｕ ｓ ｉ ｄ ｃ ｔ ｄ ｔ ａ　 ｅ ｍｕ ｔ ｌ ｎ 　 ｎ ｉ ｏ ｙ ｐ ｅ ａ ｅ 　 ｖ ｕ 　 ｕ ｆ ｄ ａ 　 ｐ ｌ 　ｏ ｉ ｉ ｉ ｎ ｅ ｎｚ ｒｂ ｉ ｅ ｓ ｓｅ ｂｏ ｔ ｇ ｒ ｓ ｈ 　 ｎ ｉａ ｅ 　ｈ ｔ 　 ｌ ｃ ｏ ａ ａ ｔ ｄ 　 ｒ ｐ ｄ ｂ 　 ｓ ｎ ｉ ｈ ｔ ｉ ｌ ｂ ｒ ｗ 　 ｉ ｈｙ ｓ ｅ ｉ ｃ ｔ　 ｅ ｏ ｉｅ Ｒａ 　 ｒ ｔ ｉｓ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｉ 　 ． ｏ ｉ ｏ 　ｈ ｔｆｏ ｅ ｇ 　 ｆｃ ｌ ｒｃ ｕ ｉ 　 ａ ｐ ｓ ａ ｈ ｇ ｌ　 ｐ ｃｆ 　 ｏ ｒ ｃ ｇ ｚ 　 ｎ ｐ ｏ ｅｎ 　 ｘ ｒ ｓ ｅ 　ｎ Ｅ ｃ ｌ ｒｔ ａ 　ｒ ｍ　 ｇ ｓ ｏ 　 ｏ ｏ 　 ｒ ｃａ ｃ ｒ ｉ ｎ 　 ｎ．Ｉ　 ｄ ｉ ｏ 　 ｎ ａ ｄ ｔ ｎ。 ｉｗｈｅ ｅ 　 ｓ 　 ｒ ａ ｗａ ｓａ ａｙ ｉ ｏ 　 ｓ ｕ 　ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｓ ｅ ｉ ｃｔ　ｎ ｉａｅ 　ｈ ｔ ｎ 　 ｒ ｔｉ 　 ａ 　 ｘ ｒ ｓ ｅ 　ｎ ｏ ａ ｙ，ｔ ｓｉ ａ ｄ ｋ ｄ ｅ ｎ ｌ ｓ 　 ｎ ｔ ｓ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓ 　 ｐ ｃ ｆ ｉ ｉ ｄ ｃ ｔｄ ｔ ａ　 ｓ ｉ ｏ ｉ ｙ Ｒａ ｐ ｏｅ ｎ ｗ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｉ　 ｖ ｒ ｓ ｅ ｔ 　 ｎ 　 ｉｎ ｙ ｓ，ｎ ｔｄ ｔ ｃｅ 　ｎ ｈ ａ ｔ ｂ ａ ｎ ｌ ｅ ， ｓ ｌｅ 　 ｄ ｍｕ ｃｅ．Ｔ ｅ ｐ ｅ ｅ ｔｓ ｄ ｅ 　 １ ｆ ｃｌ ａ ｅ ｏ ｒｆ ｔ ｒ　 ｔ ｄ ｅ 　 ｎ ｔ ｅ ｐ ｙ ｉ ｏ　 ｅ ｅ ｔ ｄ ｉ 　 ｅ ｒ ， ｒ ｉ ， ｉ ｒ ｐ ｅ ｎ ａ 　 ｓ ｌ ｖ ｎ ｈ 　 ｒ ｓ ｎ　 ｔ ｉ ｓｗ １ ａ ｉ ｔｔ 　 ｕ 　 ｕ ｅｓｕ ｉ ｓｏ 　｝ 　 ｈ ｓ． ｕ ｉ 　 ｉ ｕ ｌ 　ｏ ｇｃ 　 ｎｔ ｎ　ｆ ａ 　ｅｅ　 ｈ　 ｏａ ｏ　 ｄｉｅｔ ｃｔ ｎｏ ｉ　ｉｄｎ　ｒｔｉ 　ｎｆｈｂ　 ｓ ｇｉ ｍｕｏ ｅｌ ｉｎ　 ｌ ａ ｆ ｃｉ ｓｏ　 ｎｇｎ ，ｔｅｉ ｌｔ ｎａ 　 ｎｉ ａ ｏ　ｆｔ ｂｎｉｇｐｏ ｎ ｉ　 ｓ　ｙｕｉ 　 ｏ ｌ ｕ ｏ ｉ Ｒ ｓ ｉ ｎ ｄ ｆ ｉ ｉ 　ｓ ｅｓ ｉ ｎ ｍ ｎ ｐｅ ｏ ． ｄ ｔｃｉ ｏｍｍｕ ｏ ｒ ｃ ｐｔ ｔ ｎ ａ ｄ ｓｍｕ ａ ｉｅ ｓ ｓｅ 　 ｎ ｖ ｔ 　 ｎ ｐ ｅ ｉ ｉ ｉ ， ｎ 　 ｉ ｌｔ 　 ｙ ｔ ｍｓ ｉ　 ｉ ｏ． ａ ｏ ｖ ｒ Ｋｅ 　 ｒ ｓ： Ｃ ｌ ｒｃ ｕ ｉ ｎ ｃ ｒ ｙ ｗｏ ｄ ｏ ｏ 　 ｒ ｃａ 　 ａ ｐ； Ｒ ｎ； Ｃ ｏ ｉ ｇ Ｅ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｌ ｎ ｎ ； ｘ ｒ ｓ ｉｎ； Ａｎ ｉｏ ｙ ｔ ｄ　 ｂＲ ｎ Ｒ ｓｌ ｅｎ ｃ ａ　 Ｔ ａｅ或 Ｒ ｓｒ ａ ｄｎ ． 定 位 于细 胞 核 。在 细胞 的 增 殖 中 Ｒ ｎ具 有 许 多 重　 ａ （ ａ－ｋ 　 ｕ ｌ ｒＧ Ｐ ｓ ｉ ｅ ａ　ｅ ｔ 　 ｕ　 ｌｅ 口ｃ ａ ｐｏ ｉ） ｌ ｒ ｒ ｅ 是一种小 的 Ｇ Ｐ结合蛋 白， Ｒ ｓ ｅ 　 ｔｎ Ｔ 是 ａ 超家　 要 的作 用 ： 调控 细胞 周 期 的进 程 ， 持 核被 膜 的结 构　 维 族 的重 要成 员 。它 在 真 核 细 胞 中 广 泛 表 达 ， 主 要　 并使其行 使正常的生理功能 ， 但 参与蛋 白质和 Ｒ Ａ经　 Ｎ收稿 日期 ：２ ０ ０ ３―０ ２―１ ；接受 日期 ：２ ０ ９ ０ ３―０ ４―０　 ８ 基金项 目：国家 自然科学 基金资助项 目 （０ ３ ４ ３ １０ ０，３０ ０ ７ ） ２ ０７ ３ ９ ；中国科 学院知识创新工程重要方 向项 目 （ Ｓ Ｘ Ｋ Ｃ ２一Ｓ 一３ ３ ；中国　 Ｗ ０） 科学院 水生生 物研 究所知识创新工程领域前沿 项 目 （２ ３９　 ２０ ０ ） １ ．通讯作者 （ ｏｒｓｏｄｎ　ｕｈ ｒ ，Ｅｍａ ：ｊ ｕ＠ｉｂ ａ ．ｎ ａ ： ＋８ Ｃ ｒ ｐｎ ｉｇａｔｏ） － ｉ ｆ ｉ ｈ ．ｅｃ ．Ｆｘ ｅ ｌ ｇ ６―２ ７―８ ８ ５ ３　 ７ ７ １２缒 ｛ 　醛 ； 　 　维普资讯 １４ ７　动物学研究　２ ４卷 　由核孔 复合 物 的跨 膜 运输 ， 外 还 与 有 丝 分 裂 纺 锤　 此体 的组 装 密切 相 关 （ ａｅ ＆ Ｄ ｓｏ ２ ｏ ） Ｓ ｚｒ ａｓ ，ｏ ｏ 。近 年 来 ， 　在 人 （ ｒ ａ　ｔ ｌ１ ９ ） 鼠（ ｏ ｔｖｓｅ ａ，９ ４ 、 Ｄ ｉ ｓｅ ａ，９ ０ 、 Ｃ ｕａａ　ｔ ｌ１９ ）鸡　 ｖ 　 　产 ，获 得 的 成熟 卵 用 于 Ｒ Ａ 的提 取 及 卵 质 提 取 液　 Ｎ 的制 备 。各种 组织 的材料 均 取 自一 龄 鱼 。 　１２ 总 Ｒ ． ＮＡ 的提取 和 ｍＲ ＮＡ 的纯 化　（ ｍｅ Ｔ ｂ＆ Ｔ ｂ １ ９ ） 爪 蟾 （ ｎ ｍａｅ　ｌ２ ０ ） 果　 ｍｅ ， ９ ２ 、 Ｏ ｕ 　ｔ ， ０ ０ 、 ａ 蝇 （ ｏｚｍｉ ｔ ｌ２ ０ ）酵 母 （ ｅｈ ｍｅ ｒ ｔ １１ ９ ） Ｋ ｉ 　 　 ，０ １ 、 ｕ ｅａ Ｂ ｌｕ ｕ　 　 　 ９ ３　 ｅ ａ，总 Ｒ Ａ用 三 氟 乙酸 铯 盐 （ ｓＦ Ｎ ｃＴ Ａ）密度 梯 度超　 速离 心提 取 ，用 生 物素标 记 的寡 聚 （Ｔ ｄ ）探 针 和链　 亲合 素 包裹 的磁 珠 纯化 ｍＲ Ａ，步 骤详 见 Ｒ Ａ Ｅ ― Ｎ Ｎ 　 ｘ　ｔ ｃ ｏ　 ｉ （ ｈｒ ａ ｉ） 和 Ｐ ｌＡ ｒｃ ｍＲ Ａ Ｉ ｌ― ｒ ｔ ｎ Ｋｔ Ｐ ａｍ ｃ ａｉ ａ ｏ Ｔ ａｔ Ｎ 　ｓ ａ　 ｙ 　 ｏ和植 物 （ ａｚｌ ｔ ｌ １９ ） ， Ｈ ｉ 　 　 ，９ ７ 中 都分 离 到 了 Ｒ ｎ基 因　 ｅｅ ａ ａ家族 的成 员 ， 且 所 有 成 员 都 具 有 高 度 的 保 守 性 。 而 　这从 另一 个 侧 面 表 明 Ｒ ｎ是 一 个 具 有 重 要 功 能 的　 ａ（ ｅ　ｔ ｌ １ ９ ； ｈｊｎｅ ａ ， ９ ７ Ｒｂ ｅｋ ｅ ａ， Ｒ ｎｅ ａ， ９ ３ Ｍａａａ　 ｔ ｌ １ ９ ； ｉｂ ｃ 　ｔ ｌ 　 　 　 　ｔ ｎＳ ｓ ｉ （ ｒｍｅａ ｉ 　ｙｔｎ Ｐｏ ｇ ）操 作 手 册 。 ｏ ｅ 　 用 Ｃｏ ｔ ｈＳ Ｒ 　 Ｃ 　ｙ ｔｅｉ Ｋｔ 成 彩鲫　 ｌ ｅ 　 ＭＡ ＴＰ Ｒ Ｓ ｎｈ ｓ 　 ｉ合 ｎｃ ｓ．　 ＭＡＲ ｃ ＮＡ合 成　 ＴＤ 发育 相 关 基 因 。 正 因 为 如 此 ， 们 对 其 生 理 功 能　 １ ３ Ｓ 人ＭＡ Ｔｃ Ｎ １ ９ ） 作用 方 式 Ｙ ｓｅ ９８ 、 ａｅ ｎ＆ Ｂｏ ｅ ，９ ９ 和表 达模 式　 成 熟 卵母 细胞 Ｓ Ｒ 　Ｄ Ａ。具 体操 作 按说 明书 进　 ｌ ｌ １９ ） ｂ 　 （ ｎ ｍ 　ｔａ， ０ ０ Ｋ ｉ ｍ 　ｔａ， ｏ １ Ｌ ｐ ｚＣ ｓｓ Ｏ ｕ ａｅ ｌ２ ０ ； ｏｚ ｉｅ ｌ ｏ ； ６ ｅ― ａａ　 行 。 　 ｕ 　ｅ ａ，０ ２ 进 行 了广 泛 的 研 究 。在 这 些 研 究 中 ， ｔ ｌ２ ０ ） 　 很　 多有关 Ｒ ｎ功 能 的 结 论 都 来 自 以非 洲 爪 蟾 的 卵母　 ａ 细胞 提取 液 为基 础 所建 立 的无 细 胞 体 系 的研 究 。然　 １ ４ Ｒ ｎ基 因 ｃ Ａ 片 段 的扩增　 ．　 ａ ＤＮ根据 Ｒ ｎ 的 保 守 序 列 设 计 正 、 向 简 并 引 物　 ａ 反［ 向 简 并 引 物 为 ５－ Ａ（ Ｃ） Ｔ（ Ｃ） Ａ（ Ｇ） Ａ 正 ＇ Ａ Ｔ ＂ Ｔ Ｇ Ａ Ａ　 Ｉ （ Ｇ） ｃ Ｔ （ Ｃ） Ｔ ３ ， 向 简 并 引 物 为 ５－ Ａ 　 Ａ Ｃ ｃ ｒ Ｔ Ｃ Ｇ一’反 ＇ Ｇ Ａ（ Ｇ） Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ （ Ｇ） Ｃ Ｇ 一’； Ａ Ｔ （ Ｇ） Ｃ（ Ｇ） Ｃ（ Ｃ） Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ｇ ３ Ｊ 　而， 这些 结论 是 否普 遍适 用 于 其 他体 系 ， 有 待 于进　 还一步验 证 。 　鱼 类是 脊椎 动 物 中具 有 巨 大多 样 性 的类 群 ，因　 究 细胞 和 发育 生物 学 的模 式动 物 类 群 （ｈ Ｚ ｕ＆ Ｓ ｎ　 ｕ，ａ， １９ ｌ ９ ０， １ ９Ｉ １ ３； Ｚｈ ｕ ｔａ ， ２ ０， ２ ９ ， ９９ ｏ 　ｅ　 ｌ ００ ００１ 　 ａ，以彩 鲫 成 熟 卵 母 细 胞 Ｓ Ｒ 　 Ｄ Ａ 为 模 板 ， 增　 ＭＡ Ｔ ｃ Ｎ 扩 分析 、 Ｎ Ｄ Ａ片段 回收 、 Ｎ 片段 连 接 、 粒 转 化 等按　 ＤＡ 质 １ ５ ＲＡ Ｅ． Ｃ 克隆 Ｒ ｎ基 因的全 长 ｃ Ａ ．　 Ｃ Ｐ Ｒ ａ ＤＮ 　其具 有 许多 适合 用 于 实验 研究 的特 点 ，因而 成 为 研　 Ｒ ｎ基 因的 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ片段 ， Ｎ 片段 扩增 、 脂糖 凝胶　 ＤＡ 琼 ２ｏ ） ｏｏ 。我 们 已 经 以 鱼 类 为 材 料 ，从 遗 传 （ ｕ ｅ Ｇ ｉ ｔ 常 规方 法进 行并 测 序 。 　　 　ｂ ｉ　ｔ ｌ ０ ２ ｈ ｕ＆ Ｇ ｉ ０ ２ 、细 胞 和发　 ；Ｌｕｅ ａ，２ ０ ；Ｚ ｏ 　 ｕ ，２ ０ ） 育 生 物 学 （ ｎｅ ａ，２ ０ ；Ｘ ｅｅ ａ，２ ０ ；Ｓ ｉ Ｗｅ　 ｔ ｌ ０ １ ｉ ｔ ｌ ０ １ ｈ　 　 　　根 据克 隆 的 ｃ Ｎ Ｄ Ａ片 断 的核 苷 酸序 列 ，设 计 上　 游 和 下 游 引 物 。 用 下 游 引 物 （５－Ｇ Ｃ Ｔ　 ＇ ＴＧ ― Ｇ（ ’ ＡＣ Ｃ Ｇ Ｇ Ａ ＧＣ Ｇ 一’ 扩 增 基 因 的 ５ ５一Ａ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｃ Ｇ Ｇ ３ ） ’ 　ｅ ａ，２ ｏ ）的角 度 进 行 了较 为 广泛 的研 究 并 取 得　 Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ － ’ 和 Ｓ ＡＲ 　 ’锚 定 引 物　 ｔｌ ｏ２ 　 Ａ Ｃ ｒ Ａ Ｃ Ｇ Ｇ３ ） Ｍ Ｔ５了一 些进 展 。但 是 ，迄 今 为止 ，在 鱼类 中仅 在斑 马　５一 Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ ＧＣ Ｃ ３ ） Ｃ 鱼和 鲑 鱼 中克 隆 出 Ｒ ｎ的 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ全 长 ，尚未见 有关　 端 ，用 上 游 引 物 （ ’ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ Ａ 一’　 Ｒ ｎ基 因功 能 方 面 的研 究 报道 。先 前 ，我 们 以鱼类　 和 Ｓ ＡＲ 　’ 定 引物 （ ’ Ａ Ａ Ｔ Ｃ ｌ ３）扩 增　 ａ Ｍ Ｔ３ 锚 ５一 Ｇ Ｇ Ａ Ｔ ６ ’ Ｃ ― 成熟 卵母 细胞 提 取 液 为基础 建 立 了较 为理 想 的 无细　 基 因 的 ３ 端 。 扩 增 产 物 经 克 隆 、测 序 后 ，拼 接 基　 ’胞体 系 ，在 这一 体 系 中 ，脱膜 精 核 可 以疏 松 、解凝　 并进 而形 成 雄性 原 核 （ 发 表 数 据 ） 现 在 ，我 们　 未 。 克 隆到 了彩 鲫 Ｒ ｎ基 因 的全 长 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ，并 对 其 编码　 区进 行 了原 核表 达 ，然 后 以经 初 步 纯化 的表 达 蛋 白 　 为抗 原免 疫 家兔 ，制备 出特 异 性 的多 克 隆抗 体 。这　因 的 ５ 端 和 ３ 端 序 列 ，获 得全 长 ｃ Ｎ ’ ’ Ｄ Ａ序 列 。 　１ ６ Ｒ ｎ编 码 区 的原核 表 达及 表 达蛋 白的纯 化　 ．　 ａ根 据 已 克 隆 的 Ｒ ｎ 基 因 序 列 和 表 达 载 体　 ａｐ Ｅ ― Ｇ 的酶切 位点 ，设 计 引 物 （ 向 引 物 为 ５一 Ｇ ＸＫ 正 ’ 　ＣＡＧＡＡＴＦ ＣＡＴＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＡＣＧＡＧＣＣＧＣＡＡ一 ， ３’　就为 在 上 述 鱼 类 无 细 胞 体 系 中 验 证 和 进 一 步 研 究　 反 向弓 物 为 ５一 Ｇ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ 　 Ｉ ’ Ａ Ｃ Ａ Ｇ １ Ｔ Ａ Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ― Ａ Ｉ Ｒ ｎ的生 理 功能及 其 对受 精后 精 核 的早 期 发 育 过 程　 Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ ３） 引 物 中 含 有 Ｅ ｏ Ｒ Ｉ和 Ｈ／ ｄ ｌ ａ ｃ ｒ Ａ Ｃ Ｇ －’， ｃ　 　 ｎ ｎ 　 　的影 响 奠定 了 良好 的 基础　酶 切 位 点 、起 始 密 码 Ａ Ｇ 和 终 止 密 码 Ｔ Ａ。Ｄ Ａ Ｔ Ａ Ｎ　 片段 扩增 、质 粒 提取 、限制性 内切 酶 反 应 、琼 脂 糖　 凝 胶 分 析 、Ｄ Ａ 片 段 回 收 、Ｄ Ａ 片段 连 接 、质 粒　 Ｎ Ｎ 转 化等 按 常 规 方 法 进 行 并 测 序 ，明 确 序 列 无误 后 ， 　 ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导表 达 ，表 达 产 物 经 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 凝胶 　电泳 （ Ｄ ― Ａ Ｅ） 分 离 ，所 需 条 带 切 胶 回 收 ， Ｓ ＳＰ Ｇ 　１ 材 料 与 方 法　１ １ 实 验材 料　 ．实 验用 彩鲫 （ ａａｓ ｓ ｕａｕ　ｏ ｒ ａ ｅ ）取　 转 化 大肠 杆 菌 Ｂ ２ （ Ｅ ）ｐ ｙＳ Ｃ ｒｓｉ 　 ｒｔ ｃｌ 　 ｒ ｔ ｕａ ｓ ｏ ｖｉ ｙ Ｌ １ Ｄ ３ Ｌ ｓ ，用 １ ｍｏ Ｌ的　 　 ｍ ｌ ／自中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 关 桥 试 验 基 地 。按　 Ｗｕ （９９ １９ ）报 道 的方 法 对 成 熟 二 龄 鱼 进 行 人 工 催　■　酝　 　 夏维普资讯 ３期　李 常 健 等 ：彩 鲫 Ｒ ｎ基 因 全 长 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ的 克隆 及 其 组 织 表 达 特 异 性 分 析　Ｓ ＳＰ Ｅ电泳 检 验 其 纯 度 ，纯 化 的 蛋 白用 于 制备　 Ｄ ―ＡＧ 多克 隆抗 体 。 　 １ ７ 多克 隆 抗 体 的 制备 、Ｗｅｔｒ 　 ｌｔ ｎ ． ｓｅｎ ｂｏｔ ｇ检 验 抗　 ｉ体 的特异 性及 组 织表 达 特异 性 分析　所 克隆 的 ｃ Ａ全 长 序 列及 由此 推 断 的 氨 基 酸　 ＤＮ序 列见 图 ２ 。该 基 因 的 ｃ ＮＡ全 长 为 １ ８　ｐ Ｄ 　 １ ，其 中　 ０ ｂ 编码 区 为 ６ ８ｂ ，编 码 含 有 ２ ５个 氨 基 酸 的蛋 白 ； ４ 　ｐ １ 　另外 ，５ 端 非 编码 区 长 ６　ｐ ’ ７ｂ ，而 ３ 端 非 编码 区 长　 ’ ３６ ｂ ， 并 具 有 脊 椎 动 物 典 型 的 加 尾 信 号　 ６　 ｐＡＴＡ Ａ Ａ Ａ，含有 ２　ｐ的 ｐｌＡ尾 巴 。采 用 ＮＣ Ｉ ５ｂ ｏ ｙ Ｂ 网　纯 化 的蛋 白免疫 家 兔 ４次 ， 一 次用 量 ８ ０ ， 第 ０ 　ｇ　 以后 每 次用 量 为 ３ ０／ ， Ｘ ｅｅ ａ（ ０ １ 所述 制 备　 ０ ｚ 按 ｉ ｔ ｌ２ ０ ） ｇ 　　 多 克 隆抗 体 。取 彩 鲫 成 熟 卵母 细 胞 按 Ｇ ｉ １９ ） ｕ （ ９ ８ 的　 方法 制 备 卵 母 细 胞 间 期 提 取 液 。分 别 取 适 量 的 经　站 的 Ｂ ＡＳ Ｌ Ｔ程序 对该 基 因进 行 同 源性搜 索 ， 由表 １ 　的结 果 可见 ，该 基 因 与斑 马鱼 和 鲑 鱼 的 同源 基 因的　ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导 表达 Ｒ ｎ基 因编 码 区 的 大肠 杆 菌 Ｄ 　菌　 ａ Ｅ液、 彩鲫 卵母 细胞 间 期 提 取 液 、 同 组 织 匀 浆 液 ， 不 加　 入适 量 的 Ｓ Ｓ样 品 ｂ ｆ ｒ 在 沸 水 中煮 ５～１　 ｎ　 Ｄ ｕｅ后 ０ｍｉ，氨基 酸 序列 同 源性 分别 高 达 ９ ％和 ９ ％。 ８ ７ 　２ ３ Ｒ ｎ编码 区 的 表 达 、抗 体 制备 及 其 特 异 性 检　 ．　 ａ测　离心 后取 上 清 进 行 Ｓ ＳＰ Ｇ 电 泳 ， 转 移 到 硝 酸　 Ｄ ―Ａ Ｅ 电 纤维 素膜 上 ， 春红 染 色 ， 记 Ｍａｋｒ位 置 后 ，０ 丽 标 ｒｅ １％　 脱脂 奶 粉封 闭 。一抗 用 制 备 的 多克 隆 抗 体 ， 释 度　 稀 为 １８０ 二 抗 用 碱 性 磷 酸 酶 偶 联 的羊 抗 兔 ＩＧ抗　 ：０ ； ｇ体 ， 释度 为 １ ２５ ０ Ｃ Ｐ ＮＢ 稀 ：　０ 。Ｂ Ｉ／ Ｔ显 色 。 　设计 了一对 表 达 引物 ，在 大 肠 杆 菌 中表 达 了彩　鲫 中 的 Ｒ ｎ 因 编 码 区 全 长 序 列 。 达 的 融 合 蛋　 ａ基 表２ 结 果 与 分 析　２ １ Ｒ ｎ基 因全 长 ｃ Ａ 的克 隆　 ．　 ａ ＤＮ０ 一 一　卜 　 　 　 一 ０ 　 一 　 　采 用 ＲＡ Ｅ Ｐ Ｒ方 法 ，用 简 并 引 物扩 增 得 到 １ Ｃ ―Ｃ 　个 ｃＮ Ｄ Ａ片段 ；依 据 其核 苷 酸 序 列分 别 设 计 上 、下　 游 引物 。 以彩 鲫 成 熟 卵母 细 胞 的 Ｓ Ｒ 　Ｄ Ａ 为　 ＭＡ Ｔ ｃ Ｎ模板 ，用下 游 引物 和 Ｓ Ｒ 　 ’ 定 引 物扩 增 基 因　 ＭＡ Ｔ ５ 锚 的 ５ 端 ，得 到 ７ ０ｂ ’ ５ 　ｐ左 右 的扩 增 产 物 ：用 上 游 引　０． ５― 　 ２ ０． 一 　 １０． ５― 　０． ５― 　 ２卜 　。 　 卜０ 　Ａ　０． 一 　 １物 和 Ｓ Ｒ 　’ 定 引物 扩增 基 因 的 ３ 端 ，得 到约　 ＭＡ Ｔ３ 锚 ’ ５０ｂ ５　ｐ的 扩 增 产 物 （ １ 。扩 增 产 物 经 克 隆 后 测　 图 ） 序 ，所得 ５ 端 和 ３ 端 的序 列 经 拼 接 后 即 为 ｃ Ｎ 　 ’ ’ Ｄ Ａ全 长序 列 。 　２ ２ Ｒ ｎ的 ｃ Ａ 全长 序 列及 其 序 列 比对 分 析　 ．　 ａ ＤＮＢ　图 １ Ｒ Ｃ ―Ｃ 　 Ａ ＥＰ Ｒ扩 增 的 彩 鲫 Ｒ ｎ的 ５ 端 （ ａ ’ Ａ）和　 ３端 （ ） ’ Ｂ　Ｆｇ １ Ｒ ｃ ― Ｃ 　 ｍ ｌ ｃ ｔ ｎ ｏ ５ ｅ ｄ（ ｉ． 　 ａ ｅＰ Ｒ ａ ｐｉ ａｉ 　ｆ ’ ｎ Ａ）ａ ｄ ３ ｉ ｆ ｏ 　 ｎ　 ’ 　 ｅ ｄ （ ）ｏ　 ａ 　 ｅ ｅｆ ｍ　ｏｏ ｃｕ ｉｎｃ ｒ　 ｎ Ｂ ｆ ｎ ｇ ｎ 　 ｏ ｃ ｌ 　 ｒｃａ 　ａｐ Ｒ ｒ ｒ表 １ 由彩鲫 Ｒ ｎ ｃ Ａ推 断的氨基酸序 列与其他物种 同源基 因的 同源性 比较　 　 ａ 　ＤＮＴａ ｌ 　 　 Ｃｏ ａ ｉｏ 　 ｆｔ ｅ ａ ｉ ｏ ａ ｉ 　 ｏ ｏ ｏ ｙ ａ ｏ ｇ ｔ ｅ ｄ ｄｕ ｅ 　 ｍｉ ｏ ａ ｉ 　 ｅ ｕ ｎ ｅ 　 ｆ Ｒ ｎ ｇ ｎ 　 ｂ ｅ１ ｍｐ ｒｓ ｎ ｏ 　ｈ 　 ｍ ｎ 　 ｃ ｄ ｈ ｍ ｌ ｇ 　 ｍ ｎ 　 ｈ 　 ｅ ｃ ｄ ａ ｎ 　 ｃｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ｏ 　 ａ 　 ｅ ｅ蠢巍 　维普资讯 １６ ７　动物学研究　２ ４卷　１ Ｇ Ａ Ｃ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ Ｇ Ｃ Ｇ Ａ Ｃ ＣＡ Ａ Ｃ Ａ 　Ｇ Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ ＴＧ Ｔ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ａ ＧＡ Ｃ 　 ６ 　 Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｃ ＡＧ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｔ ＧＡ ２Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ ＡＴ Ｃ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ｇ 　Ｍ Ａ Ｅ Ｎ Ｅ Ｐ Ｑ Ｖ Ｑ Ｆ Ｋ Ｌ Ｖ Ｌ Ｖ Ｇ Ｄ Ｇ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　１ ２ Ｇ Ｔ Ｃ ＧＧ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ａ Ｇ ＧＡ Ａ Ｔ Ｇ Ｃ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ 　 ２ 　 Ｇ Ａ Ａ ＧＡ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ ＧＡ Ｔ Ｃ Ａ Ａ Ｇ Ａ Ｔ ＴＧ Ｔ Ｇ Ｋ Ｔ Ｔ Ｆ Ｖ Ｋ Ｒ Ｈ Ｌ Ｔ Ｇ Ｅ Ｆ Ｅ Ｋ Ｋ Ｙ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　ｌ ２ Ｇ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ ＧＴ Ｔ Ｃ Ａ Ａ Ｔ ＡＣ Ａ ＧＡ Ｃ Ａ Ｃ ８ 　 Ｔ Ｇ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ｔ ＡＧ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ ＡＧ Ｇ Ｃ Ｃ Ｔ 　 Ｖ Ａ Ｔ Ｌ Ｇ Ｖ Ｅ Ｖ Ｈ Ｐ Ｌ Ｖ Ｆ Ｈ Ｔ Ｎ Ｒ Ｇ Ｐ Ｉ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２ ２ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ｇ Ｃ Ｇ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ ＡＴ ４ 　 Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ ＧＣ Ｇ Ａ 从 Ａ Ａ ＧＴ Ｃ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ｇ ＡＴ 　Ｋ Ｙ Ｎ Ｖ Ｗ Ｄ Ｔ Ａ Ｇ Ｑ Ｅ Ｋ Ｆ Ｇ Ｇ Ｌ Ｒ Ｄ Ｇ Ｙ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　３ ２ ＴＡ Ｔ ＣＡ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ 从 　 ０ 　 ＴＡ Ｃ Ｇ Ｃ Ｃ Ｇ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｔ Ｔ Ａ Ｇ ＡＡ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ｃ Ａ ＡＹ Ｉ Ｑ Ａ Ｑ Ｃ Ａ Ｉ Ｉ Ｍ Ｆ Ｄ Ｖ Ｔ Ｓ Ｒ Ｖ Ｔ Ｙ Ｋ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　３２ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ ＧＧ Ｇ Ｇ Ｇ Ｇ Ｇ ＧＡ Ａ Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ ６ 　 Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ａ ＣＴ Ｇ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ｔ 　 Ｎ Ｖ Ｐ Ｎ Ｗ Ｈ Ｒ Ｄ Ｌ Ｖ Ｒ Ｖ Ｃ Ｅ Ｎ Ｉ Ｐ Ｉ Ｖ Ｌ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　４ ２ Ｔ Ｃ Ｇ 从 Ｃ Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ａ ＧＡ ＡＴ Ｇ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ ２　 Ｇ Ｇ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｇ Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ Ａ Ａ ＧＣ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ 　 Ｃ Ｇ Ｎ Ｋ Ｖ Ｄ Ｉ Ｋ Ｄ Ｒ Ｋ Ｖ Ｋ Ａ Ｋ Ｓ Ｉ Ｖ Ｆ Ｈ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　４ ２ Ｃ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ ＧＴ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ｔ ＡＴ Ｃ Ｔ Ｇ ＧＡ Ｇ ８ 　 Ｇ 从 Ａ Ｇ Ａ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ Ａ Ａ Ｔ Ａ Ｔ ＡＡ Ｔ Ｔ Ａ Ａ 　Ｒ Ｋ Ｋ Ｎ Ｌ Ｑ Ｙ Ｙ Ｄ Ｉ Ｓ Ａ Ｋ Ｓ Ｎ Ｙ Ｎ Ｆ Ｅ Ｋ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　５ ２ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ Ａ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｇ Ａ Ｔ Ｃ Ｔ Ｇ ＧＡ Ｇ ４ 　 Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ ＧＣ Ｃ Ｃ Ｃ ＧＡ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ 　Ｐ Ｆ Ｌ Ｗ Ｌ Ａ Ｒ Ｋ Ｌ Ｉ Ｇ Ｄ Ｐ Ｎ Ｌ Ｅ Ｆ Ｖ Ｅ Ｍ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　６ ２ Ｔ Ｔ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ ＣＴ Ｔ Ｇ Ｔ ＣＡ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ ０ 　 Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ Ｇ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ａ ＴＧ Ａ Ｇ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ａ 　Ｓ Ａ Ｌ Ａ Ｐ Ｐ Ｅ Ｉ Ａ Ｍ Ｄ Ｐ Ｓ Ｌ Ａ Ａ Ｑ Ｙ Ｅ Ｈ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　６ ２Ｇ Ｔ Ｔ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ａ ＡＣ Ｃ Ｃ Ｃ Ｇ ＴＡ Ｇ Ｔ Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｇ Ｔ ６　 Ａ Ｔ Ｇ 从 Ｔ Ｇ Ａ Ｃ Ｇ Ａ Ｃ ＧＴ Ｔ Ｃ Ａ ＡＧ Ａ Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｔ　 Ｄ Ｌ Ｋ Ｖ Ａ Ｓ Ｅ Ｔ Ａ Ｌ Ｐ Ｄ Ｅ Ｄ Ｄ Ｄ Ｌ 六 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ７ ２ Ａ ＴＣ Ｃ ＧＡ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ｇ Ｃ Ａ ＴＣ Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ ＴＣ Ｇ Ｔ Ａ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ 　 ２ 　 Ｇ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ ＴＧ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｔ ＣＣ Ｇ Ｇ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｇ ７ ２ Ｃ ＣＣ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ 　 ８ 　 Ｃ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ｃ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｔ ＴＡ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ Ｔ Ｔ ８ ２ ＴＴ Ｔ Ｔ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ｃ ＣＧ Ｇ Ｇ Ｔ Ｃ ＴＴ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ 从 Ｃ Ｇ ４　 ＴＴ Ｇ Ｇ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ 从 ＴＴ Ｔ Ｇ Ｔ ＡＴ Ｃ Ｔ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ｇ Ｔ Ｔ 　 ９ ２ Ｔ Ａ Ａ Ｃ Ｇ Ｃ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｇ Ｃ ＴＣ Ｔ Ｃ Ｃ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ｇ Ｇ 　 ０ 　 Ｔ ＣＣ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ａ ＡＣ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ｔ ９ ２ ＧＧ Ｇ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｔ Ｃ ＴＣ Ｔ Ｔ Ａ ＴＴ Ａ Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ ６　 Ａ Ａ Ｃ Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ｃ Ｃ Ｇ Ｇ ＴＡ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ ＧＡ Ｇ Ｃ Ｃ 从 Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ 　 １ ２ 　Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ Ａ ＡＡ Ａ ＴＣ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ａ 　 ０ ２ Ａ ＴＣ ＴＧ 从 Ａ Ａ Ｃ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ图 ２ 彩鲫 Ｒ ｎ基因的 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ全长序列及 由此推测的氨 基酸序列　Ｆ ｇ． 　 Ｎ ｃｅ ｔ ｅ ａ ｄ ｄ ｄ ｃ ｄ ａ ｎ 　 ｃｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓｏ 　 ａ 　 ｅ ｅ ｆｏ ｃ ｌ ｒｃ ｕ ｉｎ ｃ ｒ 　 ｉ ２ ｕ ｌｏ ｉ 　 ｎ 　 ｅ ｕ ｅ 　 ｍｉ ｏ ａ ｉ　 ｅ ｕ ｎ ｅ 　 ｆ Ｒ ｎ ｇ ｎ 　ｒ ｍ　 ｏ ｏ 　 ｒ ｃ ａ 　 ａ ｐ ｄ下 划 线 示 起 始 密 码 Ａ Ｇ，星 号 为 终 止 密 码 Ｔ Ａ， 黑体 为 加 尾 信 号 Ａ Ｔ Ａ。该 序列 已 输 入 Ｇ ｎ ａｌ，基 因 登 录 号　 Ｔ Ａ ＡＡ ｅＢ Ｉ ｋ为 Ａ ４ ７ １　 Ｙ２８ ５ 。Ｔ 　ｎ ｔ ｌ ｃ ｄ ｎ ＡＴ ． ｓｏ 　 ｏ ｏ 　 ｈｅ ｉ ｉ ａ 　 ｏ ｏ 　 Ｇ ｉ ｔｐ ｃ ｄ ｎ ＴＡＡ ． ａ ｄ ｔ ｅ ｐ ｌ ａ ｅ ｙ ａｉｎ ｓ ｇ ａ　 ＴＡＡＡ　 ｅ ｅ ｉ ｄ ｃ ｔｄ ｗｉｈ ｕ ｄ ｒｉ ｅ， ａ ｔ ｒ　 ｎ 　ｈ 　 ｏ ｙ ｄ ｎ ｌ ｔ 　 ｉ ｎ ＡＡ ｏ ｌ ｗ ｒ 　ｎ ｉ ａｅ 　 ｔ 　 ｎ ｅ ｌ ｎ ｓ ｅ― ｉｋ．ａ 　 ｏｄ． ｒ ｓ ｅ ｔｖ ｌ ． Ｔ ｅ ｓ ｑ ｅ ｃ 　 ａ 　 ｅ ｎ ｓ ｂ ｔ ｄ ｔ　 ｎＢ ｎｋ， ａ ｄ ｔ ｅ ａ ｃ ｓ ｉ ｎ ｎ ｍｂ ｒｉ　 ｓ ｎｄ ｂ ｌ ｅ ｐ ｃｉ ｅ ｙ ｈ 　 ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｓ ｂ ｅ 　 ｕ ｍｉｔ 　ｏ Ｇｅ ａ ｅ ｎ 　ｈ 　 ｃ ｅ ｓｏ 　 ｕ ｅ 　ｓ ＡＹ２ ８ ５１ 　 ４ ７ 　．ａ 　 白的 分 子 量 约 为 ５　Ｄ ，采 用 Ｓ ＳＰ Ｇ ０ｋ ａ Ｄ ．Ａ Ｅ分 离 纯　 很 高 的特 异性 ，是 Ｒ ｎ基 因编 码 蛋 白 的 良好 抗体 。 化 ，经检 验 达 到 电 泳 纯 （ ３ ） 图 ａ ，可作 为抗 原 制 备　 ２ ４ 组 织特 异性 表 达分 析　 ． 多克 隆 抗 体 。 以表 达 的 蛋 白作 为 抗 原 免 疫 家 兔 ４ 　 次 ，得 到 了效 价 较 高 的 多 克 隆 抗 体 。 Ｗｅｔ 　 ｌ　 ｓ ｒ ｂｏ ｅ ｎ ｔＲ ｎ基 因 的组 织 特 异 性 表 达 的 Ｗｅｔｒ　 ｌｔｎ 　 ａ ｓ ｎ ｂｏｔ ｇ ｅ ｉ分析 结 果 表 明 （ ４ ，所 制 备 的 多 克 隆 抗 体 在 卵　 图 ）ｔｇ结果 如 图 ３ ｉ ｎ ｂ所示 ，所 制 备 的 多克 隆抗 体 在诱 导　 巢 、精巢 和 肾的组 织提 取 液 中都 能检 测 到 １ 位 于　 条４ｋ ａ处 的 杂 交 带 ，即 Ｒ ｎ蛋 白 有 表 达 ；在 心 、 ａ 　 表 达 了 Ｒ ｎ基 因 的大肠 杆 菌菌 体 中检 测 到 １ ａ 条位 于　 ２ 　Ｄ ５ 　Ｄ 处 的杂 交 带 （ 融 合 的 Ｇ Ｔ蛋 白分 子 量 为　 脑 、肝 、脾 、肌 肉中未 检 测 到 相应 的杂 交 带 ， 即无　 ０ｋ ａ 所 Ｓ ２ 　Ｄ ） ６ｋ ａ ，在 彩 鲫 成 熟 卵 母 细 胞 提 取 液 中检 测 到 唯　 表达 。 　一的 １ 位 于 ２　Ｄ 处 的杂交 带 ，表 明该抗 体具 有　 条 ４ｋ ａ维普资讯 ３ 　 期李 常 健 等 ：彩 鲫 Ｒ ｎ基 因 全 长 ｃ Ｎ 的 克 隆 及 其 组 织 表 达 特 异 性 分 析 　 ａ ＤＡ２ 　６６． 　 ２４３．　 ０图 ３ 彩 鲫　 ａ Ｒ ｎ基 因 在 大 肠 杆 菌 中 的 表 达 　Ｆｇ．　 Ｅｘ ｒｓｉｎ ｏ　 ｎ ｇ ｎ 　ｒｍ　ｏｏ　 ｍｃａ 　ａｐ ｉ　 ｃ ｌ ＤＥ ） ｉ ３ ｐｅ ｓ 　 ｆＲａ 　 ｅ ｅｆｏ ｃ ｌｒｃ ｉｎ ｃ ｒ　ｎ Ｅ． ｏｉ（ ３　 ｏ ａ Ｄ ―Ａ Ｅ考 马斯 亮 蓝 Ｇ ２０染 色 。 Ｍｒ ．Ｓ Ｓ Ｐ Ｇ ．５ ：标 准 蛋 白 分 子 量 ； ｌ Ｄ ３空 菌 对 照 ；２ 未 用 ＩＴ ： Ｅ ： Ｐ Ｇ诱 导 的　对 照 ；３ Ｐ Ｇ诱 导 ４ｈ的 表 达 谱 ；４：纯化 的 Ｒ ｎ融 合 蛋 白 。 ：ＩＴ 　 ａ 　 ｂ ．Ｗｅｔｒ　ｌｔｎ 检 验 抗 体 的 特 异性 。 １ ｓｅ ｂｏｉｇ ｎ ｔ ：经 转 化 并 用 ＩＴ Ｐ Ｇ诱 导 ４ｈ的 Ｄ ３菌 ；２：彩鲫 的 卵 质 提 取 液 。 　 Ｅ 　ａ． Ｓ ― ＡＧＥ ａ ｄ ｓ ａｎ ｎ 　 ｉｈ ＤＳ Ｐ 　 ｎ 　 ｔｉ ｉ ｇ ｗ ｔ　Ｃｏ ｍａ ｓｅ ｒｌ ａ ｔ ｂ ｕ 　 ２ ０． ｍａ ｓ ｉ　ｂ ｉ ｉ 　 ｌ ｅ Ｇ一 ５ 　Ｍｒ　Ｓ ａ ｄ ｒ 　 ｒ ｔ ｉ 　 ｒ ｅ ； １ 　Ｂｌｎ 　 ｌｎ ： ｔ ａｄ ｐ ｏ ｅｎ ｍａ ｋ ｒ　 ： ｎ ａｋ ｃ ｎ ｒ ｌｏ 　 ３；２： Ｃｏ ｔｏ　 ｔ ｏ ｔｉ ｄ ｃｉ ｎ ｏ Ｐ ｏ ｔｏ　 ｆＤＥ ｎ ｒ ｌｗｉ ｕ　 ｎ ｕ ｔ 　 ｆＩ ＴＧ ； ３： Ｅｘ ｒ ｓ ｉｎ ｐ ｔｅｎ ａ ｔ ｒ 　 　ｎ ｕ ｔ ｎ ｗｉ 　 Ｐ ｈ ｏ ｐ ｅ ｓｏ 　 ａ ｔｒ 　 ｆ 　 ｈ ｉ ｄ ｃ ｉ 　 ｔ Ｉ ＴＧ； ４： ｅ４ ｏ ｈ 　Ｐｕ ｉ ｅ 　 ｎ 　 ｒ ｔ ｉ 　 ｒｆ ｄ Ｒａ ｐ ｏｅ ｎ． ｉ ｂ． Ｓ ｅ ｉ ｃｔ 　 ｆｔ ｅ ａ ｔｂ ｄ 　ｅ ｔｄ ｂ 　 ｅ ｔｒ 　 ｌｔ ｎ ｐ ｃｆ ｉｙ ｏ 　 　 ｉ ｏ ｙ ｔ ｓｅ 　 ｙ Ｗ ｓ ｅ ｎ ｂ ｏｔ ｇ． １ Ｔｒ ｓｏ ｍｅ 　 Ｅ３ａ ｔｒ４ ｈ ｉ ｄ ｃ ｉ ｎ ｗｉ 　Ｐ ｉ ｈ ｎ ｉ ： ｎ ａ ｆ ｒ ｄ Ｄ 　 ｅ　 　　 ｎ ｕ ｔ 　 ｔ Ｉ ＴＧ； ２： ｆ ｏ ｈ 　 Ｅｇ 　 ｘ ｒ ｃ　 ｆ ｃ ｌ ｒ ｃ ｕ ｉｎ ｃ ｒ 　 ｇ ｅ ｔａ ｔｏ 　 ｏ ｏ 　 ｒ ｃ ａ 　 ａ ｐ．（ ｏｅ＆ Ｂｏ ｅ， １ ９ ） Ｍｏｒ ｌ ｌ ９ ３ 。而 近 年 的 研 究 又 表 明 ， ｂ 　（Ｄａ　 ｋ ）６ ２ ６． 　 ４ ０ ３． 　 ３１． 　 ０Ｒ ｎ在 上述 的 所 有 生 命 活 动 过 程 中都 起 着 重 要 的　 ａ生 理 作 用 （ ａｅ Ｓｚｒ＆ Ｄ ｓｏ ０ ０ ６ ｅ― ａａ　 ｔ ａｓ ，２ ０ ；Ｌ ｐ ｚＣ ｓｓ ｅ 　ａ，２０ ） ｌ ０２ 。这 些 发 现 引起 了发 育 生 物 学 家 和 细 胞　 生物 学 家 的 高 度 关 注 ，并 激 发 起 他 们 对 Ｒ ｎ基 因　 ａ功能 进 一 步 研 究 的 极 大 热 情 。毋 庸 置 疑 ，对 Ｒ ｎ ａ　２ １ ０．　图 ４ 彩 鲫 Ｒ ｎ蛋 白组 织 表 达 特 异性 的 Ｗｅｔｍ　 ａ ｓ ｅ ｂｏ ｉｇ 析 　 ｌｔｎ 分 ｔＦ ｇ ４ Ｗ ｅ ｔｍ　 ｌｔ ｎ 　 ｎ ｌ ｓｓｆ ｒｔ ｓ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ 　 ｉ．　 ｓｅ ｂ ｏｔ ｇ ａ ａ ｙ ｉ　ｏ 　ｉ ｕ 　 ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｉ ｓｓ ｃｆｃｔ　 ｆｔ 　 ｎ ｐｒｔ ｉ ｆｏ ｃ ｌ ｒｃ ｕ ｉｎ　 ｐｅ ｉ ｉ ｏ ｈｅ Ｒａ 　 ｏｅｎ　ｒ ｍ　 ｏ ｏ 　 ｒ ｃ ａ ｉ ｙｃｒ ａｐ　彝， 一 　基 因 的功能 及 作用 机 理 的进一 步 研究 必将 推 动 旨在　 揭示 上 述生 命 活 动过 程 的精 确 机 理 的研 究 。像 Ｒ ｓ ａ　 家族 的其他 成 员一 样 ，Ｒ ｎ需要 与 细 胞 内的不 同蛋　 ａ 白质 和核 苷 结 合 才 能 行 使 其 生 理 功 能 （ ｏｈａｉ 　 Ｙ ｓｉｋ ＆Ｍａｙ ０ ０ 。例 如 ，一 种 叫 Ｎ Ｆ （ ｕ ｌ ｒｔ ｎ― ｒ ，２ ０ ） Ｔ ２ ｎ ｃ ａ　 ａ ｓ ｅ ｒ 　Ｍｒ ：标 准蛋 白分子量 ；１ ：卵巢 ；２ ：精 巢 ；３ ：心 ；４ ：脑 ；５　 ： 肾；６ ：肝 ；７ ：脾 ；８ ：肌 肉。 　Ｍｒ Ｓ ａ ｄ ｒ 　 ｐ ｏｅ ｎ ｍａ ｋ ｒ １ Ｏｖ ｒ ： ｔｎ ａｄ ｒ ｔ ｉ　 ｒｅ； ： ａ ｙ； ２： Ｓ ｒ ｒ ｐｅ ｍａ ｙ； ３： 　 Ｈｅ ｒ ； ４： Ｂｒ ｉ ａｔ ａｎ； ５： Ｋ ｄ ｅ ｉ ｎ ｙ； ６： Ｌ ｖ ｒ ７： Ｓ ｌ ｅ ｉｅ ； ｐ ｅ ｎ； ８： Ｍｕ ― ｓ　ｅｅ． ｌ 　ｐｒｆ ｔ ）的 Ｒ ｎＧ Ｐ结 合 蛋 白 ，就 参 与 维 持 核　 ｏｔａ ｏ 　ｃ ｒ ａ― Ｄ 内外较 高 的 Ｇ Ｐ浓度 差 （ ｉｂｃ　ｔ ｌ ９ ８ 。此　 Ｔ Ｒｂｅｋｅ ａ，１９ ） 　 外 ，Ｒ Ｃ１ Ｒ ｎ Ｐ 、 Ｒ ｎ Ｐ 、 ｉｐｒｎｊ 也 是　 Ｃ 、 ａＢ １ ａＢ ２ ｍ ｏｔ ― ｉ ３等 Ｒ ｎ履 行 其 生 理 功 能 所 必 需 的 主 要 结 合 蛋 白　 ａ（ ｏｈａ ｉ Ｍａｙ ０ ０ 。 因此 ，分 离 并 鉴 定 Ｒ ｎ Ｙ ｓｉ ＆ ｋ ｒ ，２ ０ ） ａ　的结 合 蛋 白是 揭 示 和 阐 明 Ｒ ｎ的 生 理 功 能 及 作 用　 ａ３ 讨论　机理 的重 要 途 径 。 目前 对 Ｒ ｎ基 因的 研 究 主 要 集　 ａ中于揭示 Ｒ ｎ的新 功 能 ，探 索 Ｒ ｎ的 生 理 功 能 的　 ａ ａ就所 有 真核 细胞 的生命 活 动过 程 而 言 ，细胞 周　 期 进程 的调控 、核 被 膜 的 结 构 及 生 理 功 能 的维 系 、 　 核 质 转运 、有 丝 分裂 纺锤 体 的形 成 和组 装 都是 十分　 重 要 的环 节 ，而且 它们 历来 也 是发 育 生物 学 家研 究　 的热点 问题 。作 为 Ｒ ｓ 族 的成 员 之一 ，人 们 首 先　 ａ家 发 现 Ｒ ｎ在 核 质 转 运 中充 当 了重要 的 调 控 者 角 色　 ａ分子 机理 ，以及 研 究 上 述 Ｒ ｎ结 合 蛋 白 的生 理 作　 ａ 用及 它们 彼 此 之 间的 相互 作用 等 几个 方 面 。所采 用　 的方 法 主要 有 显微 注射 反 义 Ｒ Ａ干扰 基 因 的表 达 、 Ｎ 　 免疫 耗竭 去 除 蛋 白 、免 疫共 沉 淀 、发 育时 序及 组 织　 特 异 性 研 究 、 体 外 系 统 模 拟 等 方 法 （ ｏｈａｉ＆ Ｙ ｓｉ ｋ 　维普资讯 ｌ８ ７　动物学研究　２ ４卷　Ｍａｙ ｒ ，２ ０ ） 　 ００ 。３） ａ ，表 达 蛋 白经 纯 化 后 作 为抗 原 免 疫 家 兔 ，制 备　 出 了具 有 较高 特异 性 的多 克 隆抗 体 ，该 抗体 不 仅能　 特 异 性 地 识 别 融 合 有 Ｇ Ｔ的 Ｒ ｎ基 因表 达 蛋 白 ， Ｓ ａ 　还 能 特 异 性 地 识 别 彩 鲫 成 熟 卵母 细胞 中的 Ｒ ｎ蛋　 ａ 白 （ ３） 图 ｂ 。从 Ｗｅｔｒ　ｌｔｎ ｓ ｎｂｏｔ ｇ的分 析结 果 （ ４　 ｅ ｉ 图 ）尽 管 鱼类 是研 究 发育 生 物学 的 良好 的模 式 动物　 类群 ，但 在 鱼 类 中 ，仅 见 在 斑 马 鱼 和 鲑 鱼 中 Ｒ ｎ ａ　 的 ｃ Ａ全 长 克 隆 的报 道 ，因 此 对 鱼类 中 Ｒ ｎ基　 ＤＮ ａ 因的功 能 进 行 研 究 十 分 必 要 。本 文 根 据 Ｒ ｎ 的保　 ａ守 区设 计 简 并 引 物 ，以 彩鲫 的 Ｓ Ｒ 　 Ｄ Ａ 为模　 ＭＡ Ｔ ｃ Ｎ中观 察 到 ，Ｒ ｎ蛋 白在 卵 巢 、精 巢 和 肾 中均 有 表　 ａ达 ，而在 心 、脑 、肝 、脾 和 肌 肉 中没有 表 达 。这 暗　板 ，采 用 Ｒ Ｃ ―Ｃ Ａ Ｅ Ｐ Ｒ法 ，克 隆到 大小 为 １ ８　ｐ的　 　 １ ０ ｂ１个 ｃ Ａ 全 长 （ １ ＤＮ 图 ，图 ２ ，并 采 用 Ｎ Ｂ ） Ｃ Ｉ的　示 其 在生 殖 细胞 的发 生 和发 育 、代 谢 物质 的排 泄 等　 方 面 可能 具有 一 定 的生理 功 能 。这 一猜 测 还有 待 于　进一 步 的实 验来 验证 。 　Ｂ Ａ Ｔ程 序进 行 了 同源 基 因 的搜 索 及 同源 性 比对 。 ＬＳ 　 结 果 表 明 ，根 据 本文 克 隆 的 ｃ Ｎ Ｄ Ａ全 长推 测 的编码　 氨基 酸 序 列 与 斑 马鱼 的 Ｒ ｎ基 因编 码 的 氨基 酸 序　 ａ 列具 有 高 达 ９ ％ 的同 源 性 ，与 鲑 鱼 的 Ｒ ｎ基 因 编　 ８ ａ 码 的氨基 酸序 列 也具 有 高 达 ９ ％的 同源性 （ １ 。 ７ 表 ）　 据此 ，我们认 为本文 克 隆 的 ｃ Ｎ Ｄ Ａ全 长就 是 彩鲫 的　 Ｒ ｎ基 因的 ｃ Ｎ ａ Ｄ Ａ全 长 。在 此基 础上 ，我们 对 彩鲫 　 的 Ｒ ｎ基 因编 码 区 全 长 序 列 进 行 了原 核 表 达 （ ａ 图　 参 考文 献 ： 　Ｂｅｈ ｍｅ ｒ Ｐ， Ｌ ｅ ｌｕ ｕ 　 ｅ 　Ａ， Ｔａ ｍ　Ｒ， Ｄｉ ａ ｌ 　Ｔ， Ｆ ｒｉ 　Ｎ， Ｃ ａ ｋ ｐ ｏｏ ｏｔ ｎ ｌ ｒ 　ＭＷ ． 　 １９ ９ ３． ＧＳ 　 ｎ 　 Ｐ Ｐ１ ａ ｄ ＧＳ ２， ｇ ｎ ｔ 　 ｕ ｐ ｅ ｓ ｒ　 ｆ ｔ ｅ ｐ ｐ ０ １ ｍｕｔ ｔ ｅ ｅ ｉ ｓ ｐ ｒ ｓ ｏ ｓ ｏ 　ｈ 　 ｒ ２ － 　 ｃ ｎ ａ 　 ｉ　Ｓ ｃ ｈ ｒ ｍｙ ｅ　ｃ ｒｖｓａ ｎ ａ ｃ ａ ｏ ｃ ｓ ｅｅ ｉ ｅ： ＧＴＰ ｂ ｎ ｉ ｇ ｒ ｔｉ 　ｉ ｖ ｌｅ 　ｉ 　ｔ ｅ ｉ － ｉ ｄ ｎ 　ｐ ｏ ｅｎ ｎ ｏ ｖ ｄ ｎ ｈ 　可 以预 料 ，本 文 的工作 将 为 我们 采用 免疫 耗 竭　 去除 蛋 白、免疫 共沉 淀 、体 外 系统 模 拟等 方法 ，进　一步 研 究 鱼 类 Ｒ ｎ基 因 的生 理 功 能及 分 离 鉴 定 其　 ａ结合 蛋 白，乃至 探讨 其 生理 功 能 的分 子机 理提 供 良　好 的基础 。 　ｌ ｎ ｏ 　 ｒ ｔｉ ｓ ｔ ａ　ｎ ｅ ａ ｔｗ ｔ　ｈ 　 ｉ 　 ｆ ｏ ｅｎ 　 ｈ ｔｉ ｔｒ ｃ 　 ｉｈ ｔ ｅ ＧＴＰ ｂ ｕ ｄ ｆ ｒ ｏ 　 ｅ ｒ ｇ ｌ ｔ ． ｏ ｐ ． ｏ ｎ 　ｏ ｍ　 ｆｔ 　ｅ ａ ｏ 　 ｈ ｕｙ Ｔ ａｅＲ ｎｉ ｒｂｄｐｉ Ｊ ． ｆｎ Ｊ． １ ３ ０ ． ｒ Ｇ Ｐ ｓ　 ａ　ｎＡａ ｉｏｓ 【 ｊ Ｐｎ 　 ，１ ：９ ― １３　 　 　 ｓ ｔＫｏｚ ｉｕｍｉ Ｋ， Ｓ ｉｅ 　Ｃ， Ｂｒ ｄ 　 　 ｌｖ ｒ ｓ ｏ ｙ Ｔ， Ｚａ ｇ ｎ ｈ Ｓ， Ｍｏ ｅ 　Ｂ， Ｏ ｎ ｉｄ ｎｅ ｅ　 ｚｒ ｄｅ ｗａ 　 Ｗ Ｆ． ２ ０１ Ａ ｓ ａ ｃ 　 ｏ 　 ｏ ｏ ｈ ｌ 　 ｅ ｒ 　 ｒ ｃ ｒ ｏ 　 ｅ ｅ 　 ｄ ｎ ｉ ０ ． 　 ｅ ｈ ｆ ｒ Ｄｒ ｓ ｐ ｉ ｎ ｕ ａ ｐ ｅ ｕ ｒ ｇ ｎ ｓ ｉ ｅ ｔ． ｒ ａ ｌ ｓ 　ｍａｎｅａｃ　ｆｎ ｃ ａ ｏ ａｉａｏ ［］ ｉｔ ｎ ｅｏ　ｕｌｒ ｒｎ ｚｔ ｎ Ｊ ．Ｍｏ ．Ｃｌ． Ｂｏ ． ３： ｎ ｅ　ｇ ｉ １ ｅ１ ｉ ，１ 　 １２ｌ ２―２ｌ １． ５ ６ 　 Ｃ ｕａ ａ　 ｏ ｔ ｖ ｓ ＥＥ， Ｈｓｅ 　 ｉｈ ＣＭ ， Ｒｅ 　 ， Ｄ ｉ ａ 　 Ｔ， Ｒｕ ｈ ＭＧ， Ｄ’ ｓａ ｈ ｏ ｎＭ ｒｖｓＧ ｓ　 Ｅｕ ｔｃ ｉ　 ＰＤ． １ ９ ９ ４． Ｔ ｓ ｕ －ｐ ｃｆｃ ｅ ｐ ｅ ｓｏ 　 ｆ Ｒ 　 ｓ ｆ ｒ 　ｎ ｔ ｅ ｍｏ ｓ 　 ｉｓ ｅ ｓ ｅ ｉ 　 ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ 　 ａｎ ｉｏ ｏ ｍｓ ｉ 　ｈ 　 ｕ ｅ ｉｉ 　ａ　Ｉ Ｊ ｔ ｓｒｎ Ｊ ．Ｄ ｖ Ｇ ｎｓＥ ｏ ． １ ：６ ｅ 　 ｅ ． ｅ ｅ　 ｖＺ ，２ １ ７―７ ． ５　Ｌｕ Ｊ ， Ｚｈ ｕ ｉ　Ｘ ｏ 　Ｌ， Ｚｈ ｏ ＺＳ， Ｇｕ　 Ｆ． ２ ０２． Ｓｕ ｉｓ ｎ ｍｉｒｓ ｔｌｉ 　 ａ　 ｉＪ ０ ｔｄ ｅ　ｏ 　 ｃｏａｅｌｔ ｅｍａ ｋ ｒ　 ｆ ｆ ｕ ＇ ｔ ｃａ ｌ　ｇ ｎ ｇ ｎ ｔｃ ａ ｌ ｓ ｎ ｒ ａ ｎ ａ　ｃ ｒ 　 ｒ ｅｓｏ　ｏ ｒ ａ ｉ ｉ ｙ ｙ ｏｅ ｅｉ ｒｆ ｌ ｉ 　ｆ ｍｉｉ 　ｉ　ｏ ｍｅ ｔ ｅ ｎ ｌ ａｐ［］ Ｊ ．Ｍａ ｍａ ．Ｇ ｎｍ ｍ １ ｅｏ ｅ，５ ２ ―６ ８　 ：６ ３ ２ ．Ｄｒｖ ｓ Ｇ ｉ ａ　 Ｔ， Ｓ ｉ 　 ， Ｃｏ ｔ ｖ ｓ Ｅ， Ｒ ｓ 　 ｈｈ Ａ ｕａ ａ　 ｕ ｈ ＭＧ， Ｄ’ ｓａ ｈ ｏ Ｐ ． １ ９ 　 Ｅｕ ｔｃ ｉ　 Ｄ ９ ０． Ｃ ａ ａ ｔｒｚ ｔ ｎ ｏ 　 ｏ ｒ ｎ ｖ ｌ ｒ ｓ ｌ ｅ ｇ ｎ ｓ ｅ ｐｒ ｓ ｅ 　 ｎ ａ ｈ ｈ ｒ ｃｅ ａ ｉ 　 ｆ ｆ ｕ 　 ｏ ｅ　 ａ －ｉ 　 ｅ ｅ 　 ｘ ｅ ｓ ｄ ｉ 　 　 ｕｍａ 　 ｉ ｏ ｋ ｎ［］ ｏ１ Ｒｓ ，２ （ ） ７―１５ 刘静霞 ，周 莉 ，赵振　 Ｊ ．Ｚ ｏ． ｅ ． ３ ２ ：９ ０ ．［ 山，桂建芳 ．２ ０ ．锦鲤 ４个人 工雌核发 育家 系的微卫 星标 记　 ０２ 研究 ．动 物学研 究 ，２ （ ） ７ ０ ． ３ ２ ：９ ―１ ５ ］ 　Ｌ ｐｅ－ ｓｓ Ｐ ６ ｚＣａａ　 Ｐ， Ｌ ｐ ｚＦｅ ａ ｄ ｚ Ｌ ， Ｋｒｍｅ　 ＤＢ， ｄ ｌ Ｍａ ｏ ． ６ ｅ － ｒ ｎ ｅ　 Ａ ｎ ｉ ｒ ｅ　 ｚ　Ｊ　２ ０２． Ｒａ 　ＧＴＰ ｓ 　ｅ ｐ ｅ ｓｏ 　ｄ ｒｎ 　ｅ ｌ　ｄ ｖ ｌ ｐ ｎ　ｏ 　ｔ 　 ０ 　 ｎ ａ ｅ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｕ ｇ ａ ｙ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｆ ｈｅ ｉ ｒｔａｏａｃｎｍａｃｌ ｌ ｅ ［ ］ ｅ ｔ ｒ ｉｏ 　ｅ　ｉ ｒ ｃ ｌ ｎ Ｊ ．Ｍｏ． Ｃ ｌ． Ｂｏ． ０ １９ 　 １ ｅ １ ｉ ，１ ： ７ ３― １１９ 　 ７ ８．Ｇ ｉＦ ９８ ｕ　 ．１９ ．ＲＮ 　ｒｃｓｉｇａ ｄｔｅｒｇｌｔ ｇｏ　ｅ　ｙｌ ［ ． Ｊ Ａ ｐｏｅｓ 　 　ｈ　ｅｕａｎ　ｆｃｌ ｃｃ Ｍ］　 ｎ ｎ ｉ ｌ ｅ Ｂ ｉｎ ：ＳｉｎｅＰｅｓ ２―９ ． ［ ｅｊ ｇ ｃｅｃ　ｒ ．９ ｉ ｓ ５ 桂建芳 ．１９ ９ ８．Ｒ Ａ加工 与　 Ｎ 细胞周期调控 ．北京 ：科 学出版社 ．９ ―９ ． ２ ５］ 　Ｇｕ　Ｆ， Ｓ ｎＪ ， Ｌａ ｇＳ ｉ Ｊ ｕ 　Ｍ ｉ ｎ Ｃ， Ｈｕ ｇＷ Ｙ， Ｊａ ｇＹＧ． １ ９ ｎ ａ ｉ ｎ ９ ０． Ｓｕ ｉｓｏ 　 ｔｄｅ　ｎｍｏｓ　ｍ ｒｏ ｌ　．Ｍｅｈ ｎ ｒ ｆＤ ｖｌ ｍ ｎ ，１ ３ ０ 一ｌ６． ｕｅｅ ｙ 　 Ｊ ｂ Ｊ ｃａ ｉｒ ｓ￣ｏ ｅｅｏ ｅｔ １ ：ｌ ３ ０ 　 ｐ Ｍａａａ　 ｈｊｎ Ｒ， Ｄ ｌｈｎ Ｃ，ＧｕｎＴ， Ｇ ｒｃ　 ， ＭｅｃｉｒＦ １９ ｅｐ ｉ 　 ａ　 ｅａｅ Ｌ ｌ ｏ　 ． ９ ７．Ａ ｈ 　ｓ ｌ ｕ ｉ ｕ ｔｎ ｒｌ ｔ 　 ｏ ｙ ｅ ｔ ｅ ｉ ｖ ｌ ｅ 　 ｎ ａ ｇ ｔ ｇ Ｒａ ＧＡＰ１ ｍａ ｌ ｂ ｑ ｉ －ｅ ａｅ ｐ ｌｐ ｐ ｉ 　 ｎ ｏｖ 　 ｉ ｄ ｄ ｄ ｉ　ｔ ｅ ｉ 　 ｎ ｒ ｎ 　ｔ ｎ ｃｅ 　 ｏｅ ｃ ｍ ｌｘ ｐｏｅ 　 ａ Ｂ ２ 　Ｊ Ｇ ｌ， ８ ｏ ｕ ｌａ ｐ ｒ　 ｏ ｐ ｅ　 ｒｔ ｎ Ｒ Ｉ Ｐ 　Ｉ　 ． ｅ Ｚ ８：９ 　 　 ｒ ｉ １ Ｊ ７一ｌ ７． Ｏ 　 Ｍｏ ｒ　 ｏ ｅ ＭＳ， Ｂｌｂ ｌＧ ． １ ９ ｏ ｅ　 ９ ３． Ｔ ｅ ＧＴＰ ｂ ｎ ｉ ｇ ｐ ｏ ｅｎ Ｒ ｎ ＴＣ 　ｓ ｒ ． ｈ 　 ． ｉｄｎ 　 ｒｔｉ　 ａ ／ ４ ｉ ｅ　 　ｇ ｎ ｍ 　 ｎ ｉｕａｉ 　 ｎ ｆ ｈ １． Ｉｄ ｃｉ 　 ｆ ｔｐ ｏ 　ｒ ｓ ａｅ ｔ ｅ ｏ ｅｍａ ｐ ｌ ｏ ｉ ｉ ： ｔ ｎ 　ｓ ｎ ｕ ｔ ｎ ｏ　ｒ ｌｉ ｔ ｐ ｎ　 ｏ ｉ ｄ ａ ｒ ｎｃｌｒｄｃ ｃ 　ａ （ ａａｓ ｓａ ｒｔｓｔ ｓａｅｔｃｌｒ 　ａｉｙ　 ｏ ｅ　ｒ ｉ ｃｒ Ｃ ｒ ｉ 　 ｕａｕ　ｒ ｐ ｎ　ｏｏｅ ｖｒ ｔ） ｏ ｕ ａ ｎ ｐ ｓｕ ｎ ａ ｒ ｄ ｅｂ　 ｙｒｓａｃｐｅｓｒ ［ ］ ｃ 　 ｙｒｂ ｌｇｃＳｎｃ ｙｈｄｏｔｔ　 ｒｓ ｅ Ｊ ．Ａ ｔ Ｈ ｄｏｉ ｏｉ ｉｉ ｉ ｕ ａ ｏ 　 ａ，１ （ ）　 ４ ４： ３ ６―３４． ［ 建 芳 ，孙 建 民 ，梁 绍 昌，黄 文 郁 ，蒋 一 硅 ． ３ ４　 桂 　 １９ ．鱼类染 色体组操 作的研究 ： Ｉ．静水压休 克诱导 三倍体　 ９０ 水 晶彩 鲫 ．水 生 生 物 学 报 ，１ （ ） ３ ４ ４ ：３ ６―３ ． ４ ］ 　Ｇｕ　Ｆ， Ｓ ｎＪ ， Ｌ ａ ｇＳ ｉ Ｊ ｕ 　Ｍ ｉ 　 Ｃ， Ｈｕ ｇＷ Ｙ， Ｊａ ｇＹＧ． １ ９ ｎ ｎ ａ ｉ ｎ ９ １． Ｓｕ ｉｓｏ 　 ｔｄｅ　ｎｑ ｉ ｄｆｒ ｒｔｉ ｉｐ ｒｉｔ　 ｅｎ ｃｅｓ 【 ｊ Ｎ ｔｒ ｕｒ 　 　 ｏ ｎ ｍ ｏｔｎｏｔ 　ｕ ｌ ｅ ｏｐ ｅ　 　 ｈ ｕ Ｊ ． ａｕｅ，３ ５：６ １ ６ ６　―６ ３． ６ 　Ｏｎ ｍａ Ｙ ， Ｎｉｈ ｈ ａ ｕ 　 ｓ ｉ ａ 　Ｒ， Ｔａ ａ ｓ ｉ ｒ ｋ ｈａ ｈ　Ｓ， Ｔａ ｅ ａ ｈ ｍａ ｎ ｇ ｓ ｉ 　Ｋ， Ｆ ｋ ｉ ｕ ｕ　Ａ ． 　 Ａｓ ｓ ｉ 　 ． ２ ０ ａ ｈ ｍａ Ｍ ０ ０． Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ 　ｈ 　 ｎ ｐ ｓ ＧＴＰ ｂ ｎ ｉ ｇ ｐ ｏ 　 ｐ ｅ ｓｏ 　 ｆ ｔ ｅ Ｘｅ ｏ ｕ 　 － ｉｄｎ 　 ｒ －ｔｉ ｇｎ　Ｒ ｎ ｄ ｒ ｇ ｅ ｂ ｏｅｅｉ ［ ］ Ｄ ｖ ｅ ｎｓ Ｅ ｏ ． ｅ 　 ｅｅ ａ　 ｕ ｎ 　 ｍ ｒ ｇ ｎｓ Ｊ ． ｅ ．Ｇ ｅ　 ｖ１ ， ｎ ｉ ｙ ｓ 　２１ ０： ３ ５―３ ７． ２ ２ 　 Ｒｅ 　 ， Ｄｒｖ ｓ ｎＭ ｉ ａ　Ｇ， Ｄ’ ｓａ ｈ ｏ Ｐ， Ｒｕ ｈ Ｅｕ ｔｃ ｉ　 ｓ 　ＭＧ ． １ ９ ９ ３． Ｒａ ／ ｎ ＴＣ４： Ａ　 ｓ ｌｌ ｎ ｃ ｅ 　ＧＴＰ－ ｉ ｄ ｎ 　ｐ ｏ ｅｎ ｈ ｔ ｅ ｌ ｔ ｓ 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，桂建芳 ．２０ ｂ．应　 ０１ 用微卫星标记对 雌核发 育银鲫 的遗 传 多样性 初探 ．动物 学研　究 ，２ （ ） ５ ２ ４ ：２ ７―２ ．　 ４ ６ ＩＺｈ 　 Ｙ ， Ｓ ｎ ＹＨ　 ２ ０ ｕＺ ｕ　 ０ ０． Ｅｍ ｙ ｎｉ ｎ ｄ ｇ ｎ ｔ 　 ｎ ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｉ 　 ｓ 　 ｂｒ ｏ ｃ 　ａ 　 ｅ ｅ ｉ ｍａ ｐ ｌ ｔ 　 ｎ ｆ ｈ ｃ ０ ｉｏ　ｈ　ｎｃｅｐｒ 　Ｎ ｐ３ ８ ［ ． Ｐ ｏ ． Ｎ ｔ． Ａ ａ ． ｎ ｔｅ ｕ ｌ ｏｉ ｕ 一５ ｏ ｎ Ｊ］ ｒｃ ａ１ ｃｄ　Ｕ　 ． ９ ， ６： ５ ６ ― ５ ２１　 ５ｌ ５ ．　 ．Ｙｏ ｈａ ｉＡ ， ＭａｙＤ． ２ ０ ｓ ｉｋ　 ｒ　 ０ ０． Ｔｈ 　ｏｅｏ　 ｎ ｉ　 ｕ ｌａ　ｕ ｔ ｎ 『 　 ｅｒｌ　 ｆＲａ 　ｎ ｎ ｅｅ ｆｎｃｉ ｒ ０ Ｊ］Ｃ ｒｅ ｔＯｐ ｎ ｏ 　ｎ Ｃ ｌ Ｂｉｌ ｇ ｕ ｒｎ 　 ｉ ｉ ｎ ｉ 　 ｅｆ ｏ ｏ ｙ．１ 　 ２： ３ ２―３ ７． ０ ０ 　ｌＪ Ｊ． 　　Ｉ Ｒ ｓａｃ Ｉ ｅｅ ｒ 　 ｈ， ｌ （ ） １ ０ １ ： ７―２ 　 ７．‘ 毒 蛋 白酶 结构 与 功 能及 其对 血 液 凝 固 系统 的 作 用 ＂ ‘ 　 蛇 　获 ２０ ０ ２年云南省科 学技术 奖 （ 自然科 学类 ）一等 奖　由 中国科学 院 昆 明动物 研 究所 张 云研 究 员 等开 展 的 “ 毒 蛋 白酶 结构 与 功能 及其 对 血液 凝 固 系统 的作　 蛇 用 ” 的研 究 项 目获 云南 省 ２ ０ ０ ２年科 学技 术 奖 （ 自然科 学类 ）一 等奖 。 　 首 先 ，该项 目系统 全 面地研 究 了中 国常见 蛇 类蛇 毒对 哺 乳 动物 血 液凝 固系统 的作 用 。其 次 ，发 现并 克　 隆 了竹 叶青 蛇毒 专一 纤溶 酶 原激 活 剂 （ Ｓ ―Ａ） Ｔ Ｖ Ｐ ，利用 Ｔ Ｖ Ｐ 的定 点 突 变 结 果 和 三 维 空 间 结构 ，确 定 了　 Ｓ ．Ａ Ａ ｐ ７残基 在人 ｔ Ａ和 ｕＰ 中的关 键作 用 ；研 究 了眼镜 蛇科 蛇 毒第 Ｘ因子 激 活 剂 ，以及 蝮 蛇蛇 毒 凝 血 酶　 ｓ９ ― Ｐ ―Ａ原 激 活剂 ；还完 成 了高 比活 竹 叶青 蛇 毒 凝 血 酶 样 酶 Ｓ￣ｎｂｎ和 ３个纤 维 蛋 白原 溶 酶 ｓ。 。 ｂ 。１ ｔ ｏｉ ｔｉ ｆ　ｓ 　ｉ、２、 ３ 　的分 离纯化 、酶学 性 质 、底物 专 一性 及 其 与 Ｔ ＶＰ Ｓ ―Ａ的免 疫 交 叉反 应研 究 ，证 明它 们 是 与 同种 蛇 毒 来 源 的　 ＴＶＰ Ｓ ―Ａ结 构 高度 相似 ，但 功 能却 不 相 同 的专一 蛋 白酶族 。最后 ，综 合 国 内外最 新 进 展 ，从 蛋 白酶 底 物 专　一性 、免 疫化 学 和分 子生 物学 （ 列 及 空 间 结 构 模 拟 ）方 面 ，对 蛇 毒 蛋 白酶 生 物 多 样 性 进 行 了 比较 和探　 序该 项 目先后 在 Ｊ ．Ｂ ｏ ． Ｃ ｅ ， Ｔ ｒｍｂｓ ｉ１ ｈ ｍ． ｈｏ ｏｉ Ｈ ｍ ｓ ｓ ，Ｆ ｂｉ ｌ ｉ， Ｔｘｃｎ等 Ｓ Ｉ 期 刊 上发 表　 ｓ＆ ｅ ｏｔ ｉ ａ ｓ ｉ ｎ ｙ ｓ ｏｉ ｒ０ ｓ ｏ Ｃ源讨 ，在 结构 与 功能 关 系上 ，澄 清 了 目前在 这 类 蛋 白酶研 究 中存 在 的混 乱　论文 １ ２篇 （Ｃ 源 期 刊引用 １０次 以 上 ） ＳＩ ０ ，在 国 内核 心期 刊 上 发表 论 文 ８篇 ；获 法 国专 利一 项 。这 项 工作　所取 得 的进 展在 理论 上 对 于揭 示生 物 大分 子 相互 作用 的研 究 具有 重 要 意 义 ；在 实 际应 用 中，也 为研 制 第三　代血 栓溶 解 药物 和新 的临床 诊 断试 剂 提供 了基 础 知识 。 　王 桂 兰　（ 国科 学 院 昆 明 动 物 研 究 所 中 ６０２ ） ５ ２ ３　 All rights reserved Powered by copyright ©right 。文档资料库内容来自网络，如有侵犯请联系客服。}