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I在DNA双链上随机切出切口然后DNA聚匼酶I沿缺口水解5?端核苷酸,同时在3?端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分子DNA标记(>1000 bp最好),但单链DNA、RNA不能用该法标记
随机引物法。随机引物是指含有各种可能排列顺序的寡聚核苷酸片断嘚混合物因此它可以与任意核苷酸序列杂交,起到聚合酶反应的引物作用将待标记的DNA探针片断变性后与随机引物一起杂交,然后以此雜交的寡聚核苷酸为引物在大肠杆菌DNA聚合酶I大断段(Klenow Fragment)催化下,合成与探针DNA互补的DNA链当在反应体系中含有a-32P-dNTP时,即形成放射性同位素标記的DNA探针具有上述优点,可代替缺口平移法此外大小、单双DNA均可标记,标记均匀标记率高,但也不能标记环状DNA随机引物法标记探針一般长400~600 bp。
(3)末端标记法(又叫尾标)利用末端转移酶可进行“尾标”,尾标适用于寡核苷酸探针标记寡核苷酸探针多用于核酸“點”突变的检测,该探针可用核酸合成仪人工合成克隆出的探针一般较长,特异性好标记量大,杂交的检出信号强