梯度重复性不好,等度就没有问题的我们 电影

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【求助】二元梯度洗脱基线不稳定,重复性差是怎么回事
【求助】二元梯度洗脱基线不稳定,重复性差是怎么回事
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这个帖子发布于2年零62天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我们现在用到的二元梯度洗脱,基线重复性很差,几乎每次进样基线都不一样,后来试过不进样,只走空白梯度,仍然不能重复,将所用到的有机相、水相全部更换后,仍然不行,不知道是怎么回事,哪位高手指点一下,**!
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么考虑机器的问题?
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不会是低压混合的比例阀,且没有脱气机做的吧
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进下一针前,梯度峰出完了么另外我想知道被屏蔽的是个啥字,以此为戒
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是不是跪qiu
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梯度洗脱基线不平有很多原因。首先,你的吸收波长是多少,是否为末端吸收;二者,高压梯度的基线较低压梯度差很多,一般低压梯度的效果较好;三,如果使用梯度洗脱,溶剂应选用更高标准的,如进口的乙腈或甲醇,水也要选用纯净度好的。四,环境温湿度等是否恒定,环境的温度变化对基线的影响也很大。
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我认为是在线混合不均匀造成的,不知道您用的有机相和水相分别是什么?检测波长是多少?若水相为离子对试剂,检测波长为低波长,则在线混合容易出现混合不均匀,基线波动大等问题;二是考虑二元高压的泵系统,其中一个泵是否出现问题了?可以比较两次进样所记录的压力曲线,若压力线重合不好,则考虑将泵系统的单向阀等部件 拿出来 清洗一下。若属于第一种情况,建议两种溶剂预混合一下,即“你中有我,我中有你”可能会改善基线。
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是不是你的梯度程序里没有设置回到起始比例走10分钟左右平衡柱子的程序?而你实际操作中也没等平衡好就直接进下一针。。。。。。
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又奇迹般的好了,真是奇怪,没搞明白是怎么回事
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共有&22&人回复了该问答关于梯度洗脱的问题
多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验,发现一般都是中药材用梯度洗脱,西药很少(而目前我还没用过梯度洗脱)是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊?
回复于: 9:27:00由于中药成分比西药复杂,为了更有效的把两个以上的成分用较短的时间分离开,所以在中药中使用梯度分析要比分析西药时多。
回复于: 9:21:00样品脏,成分复杂时就会用到梯度洗脱。中药中含的物质较西药复杂,所有常用梯度洗脱。
回复于: 23:40:00应该没这样的相关性就象毛毛说的。梯度洗脱响应高(一般有机相越高化合物响应越高,此外走梯度峰型变窄,可以提高信噪比)等度洗脱 用恒定配比的溶剂系统洗脱是最常用的色谱洗脱方式,方法简便、色谱柱易再生等是其优点。但对于成分复杂的样品,往往不能兼顾某些组分的分离要求,所以需用梯度洗脱。
回复于: 13:12:00用梯度洗脱主要是为了分开一针样品中极性差别较大的组分,否则要么各组分峰分离不开,要么就是分离时间长,峰展宽严重。中药里的成分复杂,各组分极性相差较大,可能会常常用到梯度洗脱,但是还是建议尽量用等梯度洗脱,原因很多,首先摸条件花的时间短;对仪器要求也不高,一元泵的就可以;还有每个样品分离周期相对较短,不必像梯度洗脱时还要等待回到初始梯度并冲洗一段时间;搂主可以看看自己要分析的样品的特点以及对结果的要求,选择合适的分析方法。
回复于: 12:57:00原文由 pengguifang 发表:  多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验,发现一般都是中药材用梯度洗脱,西药很少(而目前我还没用过梯度洗脱)是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊?  一般来说中药材中的组分比较多,而西药的组分相对较少,所以测试中药材的分离条件要比西药的高。采用梯度洗脱的好处就是便于选择更好的分离条件,即在所有组分都能完全分离的条件下,分析一个样品使所需时间能更短。
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回复于: 12:24:00
原文由 pengguifang 发表:多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验,发现一般都是中药材用梯度洗脱,西药很少(而目前我还没用过梯度洗脱)是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊?有这样的相关性么?我不清楚,我觉得应该是不分中药还是西药才是吧?我们做的是西药,但是测定有关物质(杂质)的时候也是用梯度洗脱的啊!其实,还是取决于方法开发和选择,毕竟,如果能够被证实的等度和梯度均可以得到相同的结果,那么为什么不用等度洗脱呢?
回复于: 12:43:00
用梯度洗脱是为了把两个以上的成分用较短的时间分离开。
回复于: 12:57:00
原文由 pengguifang 发表:  多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验,发现一般都是中药材用梯度洗脱,西药很少(而目前我还没用过梯度洗脱)是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊?  一般来说中药材中的组分比较多,而西药的组分相对较少,所以测试中药材的分离条件要比西药的高。采用梯度洗脱的好处就是便于选择更好的分离条件,即在所有组分都能完全分离的条件下,分析一个样品使所需时间能更短。
回复于: 13:12:00
用梯度洗脱主要是为了分开一针样品中极性差别较大的组分,否则要么各组分峰分离不开,要么就是分离时间长,峰展宽严重。中药里的成分复杂,各组分极性相差较大,可能会常常用到梯度洗脱,但是还是建议尽量用等梯度洗脱,原因很多,首先摸条件花的时间短;对仪器要求也不高,一元泵的就可以;还有每个样品分离周期相对较短,不必像梯度洗脱时还要等待回到初始梯度并冲洗一段时间;搂主可以看看自己要分析的样品的特点以及对结果的要求,选择合适的分析方法。
回复于: 19:44:00
中药材中的成份较为复杂,而且组份之间的性质也近视.两峰之间不好分开或者是根本分不开,这样就必须用梯度洗脱,好把不好分的峰分的开.好来定性.
回复于: 23:40:00
应该没这样的相关性就象毛毛说的。梯度洗脱响应高(一般有机相越高化合物响应越高,此外走梯度峰型变窄,可以提高信噪比)等度洗脱 用恒定配比的溶剂系统洗脱是最常用的色谱洗脱方式,方法简便、色谱柱易再生等是其优点。但对于成分复杂的样品,往往不能兼顾某些组分的分离要求,所以需用梯度洗脱。
回复于: 9:21:00
样品脏,成分复杂时就会用到梯度洗脱。中药中含的物质较西药复杂,所有常用梯度洗脱。
回复于: 9:27:00
由于中药成分比西药复杂,为了更有效的把两个以上的成分用较短的时间分离开,所以在中药中使用梯度分析要比分析西药时多。
回复于: 9:33:00
用梯度洗脱是为了把两个以上的成分用较短的时间分离开。可以不用梯度洗脱就可以分离主要的成分,那当然是最好的了哦!
回复于: 10:26:00
中药的组分比较复杂,难分离要用梯度洗脱
回复于: 19:38:00
原文由 tanghuizhi01 发表:梯度洗脱响应高(一般有机相越高化合物响应越高,此外走梯度峰型变窄,可以提高信噪比)等度洗脱 用恒定配比的溶剂系统洗脱是最常用的色谱洗脱方式,方法简便、色谱柱易再生等是其优点。但对于成分复杂的样品,往往不能兼顾某些组分的分离要求,所以需用梯度洗脱。梯度洗脱峰形变窄,的确如此,但是,有一定的必然性么?还是有什么其他的原因?许多时候,梯度洗脱造成最大的不便就是时间上的浪费,平衡柱子需要几十分钟的时间,还有就是由于梯度洗脱造成的基线不稳,有时候扣除空白效果也不是很好。
回复于: 20:32:00
ding ding kan
回复于: 13:19:00
梯度洗脱流动相极性发生变化,可以把不能等度洗脱分开的成分分开
回复于: 16:22:00
不错,不错,不错,不错,不错,
回复于: 9:50:00
是否采用梯度洗脱要视样品的复杂性而定。一般来说,中成药成分较为复杂,首选梯度洗脱。
回复于: 10:08:00
是啊!西药一般都是合成的!(应该是吧)而中药来源于植物的,成分比较复杂,用梯度洗脱的方法比较容易分得开!
回复于: 21:52:00
用梯度的话药材各峰会分的比较开,但能用等度分析最好
回复于: 22:50:00
中药材成分比较复杂,从非极性到极性成分都有可能存在.西药主要成分一般只有一种或两种,西药绝大多数是全合成,杂质相对来说非常小,却结构较类似.而梯队洗脱很难保证基线的非常平衡.小的波动很有可能与小杂质区分不出.相对而言等度能保证基线的平稳及良好的重复性.等度比较适合西药检测.梯度比较适合中药的检测.
回复于: 19:09:00
你说的很有道理的!
回复于: 17:57:00
如果峰都可以分开,而且峰形好,分析时间又不长,当然用等度洗脱了。但如果分析不出来,就只能用梯度了,平衡起来也慢
回复于: 21:27:00
原文由 pengguifang 发表:多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验,发现一般都是中药材用梯度洗脱,西药很少(而目前我还没用过梯度洗脱)是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊?在等度的情况不能满足分离效果的情况下,才用梯度。做梯度一定要先做空白,中药样品一定要加保护柱哈。
回复于: 21:32:00
梯度洗脱主要是为了获得最佳的分离
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