机械法和酶解法分离愈伤组织成为分离单细胞技术详细步骤。

[转载]原生质体分离的方法之一—纤维素酶解法
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以上网友发言只代表其个人观点,不代表新浪网的观点或立场。下图示“番茄—马铃薯”杂种植株的培育过程,其中①~⑤表示过程,字母表示细胞、组织或植株。下列说法正确的是() A.e是一团高度分化状态的愈伤组织细胞B.可根据质壁分离现象鉴别杂种细胞的细胞壁..域名:学优高考网,每年帮助百万名学子考取名校!名师解析高考押题名校密卷高考冲刺高三提分作业答案学习方法问题人评价,难度:0%下图示“番茄—马铃薯”杂种植株的培育过程, 其中①~⑤表示过程,字母表示细胞、组织或植株。下列说法正确的是(? ?
?  A.e是一团高度分化状态的愈伤组织细胞 B.可根据质壁分离现象鉴别杂种细胞的细胞壁是否再生 C.①表示在蒸馏水中用酶解法处理植物细胞获得原生质体D.植物有性杂交和体细胞杂交都能克服远缘杂交不亲和的障碍马上分享给朋友:答案B点击查看答案解释本题暂无同学作出解析,期待您来作答点击查看解释相关试题相关知识点:
在植物组织培养过程中,愈伤组织的形成和形态发生是十分关键的一步。而这除需要必备的营养和一些刺激因素外,还需要有起诱导作用的物质,它是 ( )A.铜、锌等微量元素 B.细胞分裂素和生长素C.蔗糖和葡萄糖 D.维生素和氨基酸 [组织培养、生长素、细胞工程、愈伤组织、细胞分裂素、协同作用、植物激素、蔗糖]
在植物组织培养过程中,愈伤组织的形成和形态发生是十分关键的一步。而这除需要必备的营养和一些刺激因素外,还需要有起诱导作用的物质,它是 ( ) A.铜、锌等微量元素
B.细胞分裂素和生长素 C.蔗糖和葡萄糖
答案:B【解析】试题分析:愈伤组织的特点:高度液泡化,无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织。决定植物脱分化和再分化的关键因素是:植物的种类和比例,特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要,被称为“激素杠杆”。所以选B。考点:植物细胞工程点评:本题难度一般,要求学生识记植物细胞工程的相关知识,考查学生对植物组织培养的理解。
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[在植物组织培养过程中,愈伤组织的形成和形态发生是十分关键的一步。而这除需要必备的营养和一些刺激因素外,还需要有起诱导作用的物质,它是 ( )A.铜、锌等微量元素 B.细胞分裂素和生长素C.蔗糖和葡萄糖 D.维生素和氨基酸 [组织培养、生长素、细胞工程、愈伤组织、细胞分裂素、协同作用、植物激素、蔗糖]]相关内容:
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36海洋生物技术-2
2.接种设备:无菌超净工作台,用于培养材料的消毒;3.培养设备;①带日光灯的培养架,主要用于接种后材料的培养;②恒温箱:又称培养箱,可用于原生质体和酶制剂的保;③摇床与转床:在液体培养基中,可改善培养基中的培;4.驯化设备①温室②防虫网室;5.其它辅助设备①培养基灌装机及洗瓶机②空调机③;11基本实验技术;1.玻璃仪器的洗涤;2.灭菌;①培养基灭菌:分别灭菌
2.接种设备:无菌超净工作台,用于培养材料的消毒及接种。3.培养设备①带日光灯的培养架,主要用于接种后材料的培养。②恒温箱:又称培养箱,可用于原生质体和酶制剂的保温,也可用于组织培养材料的保存及暗培养。③摇床与转床:在液体培养基中,可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。4.驯化设备①温室
②防虫网室5.其它辅助设备①培养基灌装机及洗瓶机②空调机③ 除湿机⑤冰箱④烘箱⑥纯水机与蒸馏水发生器⑦天平和显微镜⑧酸度计11基本实验技术1.玻璃仪器的洗涤2.灭菌①培养基灭菌:分别灭菌②玻璃器皿和器械:干热灭菌③藻体材料:灭菌剂,抗生素④接种区12外植体的无菌化技术1.仪器:超净工作台2.材料准备:藻体、单藻培养株、半成熟藻体3.消毒:消毒海水、碘化钾、次氯酸钠、抗生素4.切割与接种:选取具有分生组织的部位切割需无菌条件下切割5.方法:暂培养,确认有无污染13细胞培养单细胞的分离1.机械法2.酶解法3.培养物分离法(愈伤组织法)细胞悬浮培养1.体细胞悬浮培养2.大型褐藻生殖细胞悬浮培养单细胞培养:制备、培养(平板培养、看护培养、饲养层培养等)大型海藻器官的培养1.假根离体培养2.海藻假柄和叶状体切段的培养 第五章 海洋动物的细胞操作又叫细胞工程是指利用细胞融合和显微操作等方法对生物体的构成单位――包括体细胞和生殖细胞直接用手操作,创造出对人类有价值的物质和生命体的技术。细胞操作和染色体操作以及基因操作关系密切,所以有时将它们统称为细胞操作。 2常用技术:
动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植单克隆抗体的制备多莉羊的培育过程3 细胞遗传操作常用方法一、抑制细胞分裂
二、细胞融合
三、染色体失活的方法
四、染色体的观察及倍性分析五、体细胞及配子的制备
六、卵和早期胚胎细胞操作的前处理4细胞遗传操作常用方法5抑制细胞分裂1化学方法: 化学方法主要是利用能够抑制分裂的化学物质来干预细胞的分裂过程,从而达到预期的目的。常用的化学药品有:细胞松弛素B、6-二甲氨基嘌呤、咖啡因等。细胞松弛素B(CB):是一类真菌的代谢产物,抑制细胞分裂的机制是特异性地破坏微丝,使最终导致细胞分离的由微丝构成的“收缩环”解体,抑制细胞分裂。有效的使用浓度是0.5~1.0 mg/dm3,一般溶解在0.1%的二甲基亚砜中使用。二甲氨基嘌呤(6-DMAP):通过对磷酸化激酶的抑制,抑制一系列有磷酸激酶参与的生化反应和细胞功能,如抑制极体的形成和释放等,有效浓度为200~400 μmol/dm3。咖啡因:其作用效果在于提高细胞内的Ca2+浓度,而构成细胞分裂过程中的纺锤丝的微管对Ca2+浓度非常敏感,在微管自装配中Ca2+起作用, Ca2+浓度极低或高于10-3时,会引起微管二聚体的解聚,阻止分裂。使用浓度为5~15mmol/dm3。dm3:立方分米2 物理方法:物理方法是在细胞分裂周期中施加物理处理影响和干预细胞的正常分裂,达到预期目的。常用的方法有温度休克法和静水压等。温度休克法:其机制是引起细胞内酶构型的变化,不利于酶促反应的进行,导致细胞分裂时形成纺锤丝所需的ATP的供应途径受阻,使已完成染色体加倍的细胞不能分裂。常用温度的确定根据应用种类的不同而有所差异,一般是在该物种生存温度范围的上下限附近。 水静压:利用水静压设备(液压机等)产生的压力施加于处理对象。其机制主要是抑制纺锤体的微丝和微管的形成,阻止染色体的移动,从而抑制细胞分裂。常用的压力范围是200~500 kg/cm2。6细胞融合细胞融合又称细胞杂交,是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象。体外动物细胞的融合,一般多用灭活的仙台病毒或聚乙二醇(,PEG)诱导两种细胞融合,制成一种新品系的杂交细胞,此杂交细胞具有很强的生命力,增殖旺盛。细胞融合术是细胞遗传学、细胞免疫学、病毒学、肿瘤学等研究的一重要手段,也是制备单克隆细胞株的重要技术。单克隆抗体技术就是通过细胞融合技术发展起来的,在生命科学研究核应用方面产生了重大影响。1. 病毒诱导融合:有许多种类的病毒能介导细胞融合,最常用的是灭活的仙台病毒(HVJ),为RNA病毒。病毒诱导细胞融合的过程有:首先是细胞表面吸附许多病毒粒子,接着细胞发生凝集,几分钟至几十分钟后,病毒粒子从细胞表面消失,而就在这个部位邻接的细胞的细胞膜融合,胞浆相互交流,最后形成融合细胞。2. 化学融合剂诱导融合:化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽,其中最常用的是聚乙二醇(PEG)。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用:①可促使细胞凝结;②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层,从而使相互接触的细胞膜之间发生融合,进而细胞质沟通,形成一个大的双核或多核融合细胞。3. 电融合:是指细胞在电场中极化成偶极子,并沿着电力线排列成串,然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。
7染色体失活的方法染色体失活是细胞遗传操作中常用的方法,如雌核发育就是通过精子的失活来实现的。辐射处理:包括紫外线、γ射线、X射线等。较为常用的是紫外线。紫外线主要作用于DNA,经紫外线照射后,DNA的氢键断裂,同一链上相邻的或两链上相对应的胸腺嘧啶之间形成二聚体,使DNA局部变性,从而影响正常的复制和转录,使DNA失活。操作过程中需要考虑的因素有:紫外线照射剂量、精子的浓度、精子铺设的厚度、照射的时间等。例如对于贝类而言,照射剂量一般在500~1000 uW/cm2,精子铺设的厚度为1 mm,照射的时间为0~3mim,另外需要注意DNA的光复活作用,照射结束之后要严格避免光照。 化学处理:可用于精子灭活的化学物质有甲苯胺兰、乙烯脲、二甲基硫酸盐、吖啶黄、噻嗪等。8染色体的观察及倍性分析1、染色体分析法常规滴片法:主要步骤是首先选取胚胎、早期幼虫或动物组织依次经0.005%~0.01%秋水仙素处理(15~40 min)、0.075 mol/dm3 KCl低渗(10~30 min)、Carnoy’s固定液固定(甲醇:冰醋酸=3:1)、50% 醋酸解离 (1~5min)、细胞悬液滴片(冰冻或热滴片)制成染色体标本,吉姆萨等染色,显微镜观察。此方法可以用于染色体倍性观察。压片法:此方法常用于观察早期胚胎染色体,具体的压片方法和常规的生物制片的方法相同。2、流式细胞术流式细胞术检测倍性水平的基本原理是用DNA-RNA特异性荧光染料(如DAPI)对细胞进行染色,在流式细胞仪上用激光或紫外光激发结合在细胞核的荧光染料,依次检测每个细胞的荧光强度,因DNA含量的不同得到荧光强度的不同分布峰值,与已知的二倍体细胞或单倍体细胞荧光强度对比,判断被检查细胞群体的倍性组成。一般程序包括采样、加入DAPI/DMSO溶液、涡旋振荡器振荡、注射器反复抽吸、筛网过滤,制成细胞悬液,上机分析。用途:全自动细胞免疫表型分析、绝对细胞计数、细胞因子测定、细胞凋亡检测、血小板功能检测、干细胞计数、交叉移植配型,细胞周期,DNA参量分析,HLA-B27检测,肿瘤学,血液学研究等。3、荧光染色法此方法与流式细胞术相似。其过程是获取生物活性组织(鳃组织及血细胞等),用新鲜配制的卡诺氏液固定,经50%醋酸解离后制成细胞悬液,滴片。而后将制备好的片子于4℃条件下用荧光染料DAPI染色,用紫外光激发DAPI染色的细胞核,在配有光度计的荧光显微镜下比较预期三倍体细胞核的荧光强度与同一片的二倍体细胞荧光强度。9体细胞及配子的制备细胞的制备配子的制备:亲鱼的选择与培育
产卵和授精10卵和早期胚胎细胞操作的前处理鱼卵表面的卵膜受精后膨胀硬化,成为显微操作的障碍,因此有必要进行前处理。1、卵膜的去除:物理方法:用镊子直接将膜剥离;化学方法:常用的酶类有胰蛋白酶、木瓜酶、枯草溶菌素等。2、无膜卵的培养:未受精裸卵在pH 9.5,高浓度(1.1-1.5)EM199培养基中较稳定;受精裸卵可在Holtfreter液中,或50-70%Yamamoto液中发育。3、卵膜硬化的抑制:方法:在1M还原型谷胱甘肽水溶液(pH8.0)中吸水,可阻止卵膜蛋白质的二硫键形成和卵膜硬化。11海洋动物性别决定的特点性染色体缺少或处于进化的初级阶段;表型性别容易改变;性逆转后个体具有正常的功能;YY型雄鱼可育12凡雌性个体两条性染色体相同的动物,统称为“雌性同型配子动物”,简称“雌性同配动物”。13鱼类的性别遗传性别(genetic sex):在受精时通过一半来自卵子以及一半来自精子的染色体的结合而形成的,又称染色体性别(chromosomal sex)。鱼类主要有五大遗传性别:XX-XY,XX-XO,ZW-ZZ,ZO-ZZ,X1X1X2X2 -X1X2Y。XX-XY型:雌性配子同型,雄性是配子异型。XX-XO型:雌性配子同型。雄性配子异型,但有半数配子缺少性染色体。ZW-ZZ型:雌性是配子异型,雄性配子同型。ZO-ZZ型:雄性配子同型。雌性是配子异型,但有半数配子缺少性染色体。X1X1X2X2 -X1X2Y:墨西哥科鱼Meguppsilon aporus染色体组性为:雌鱼2n=44+ X1X1X2X2,雄鱼2n=44+ X1X2Y。动物有无性生殖和有性生殖两种基本生殖方式,有性生殖与全部以有丝分裂为基础的无性生殖不同,雌雄两个体各自产生一个单倍体配子,两者结合成合子,合子发育成新个体。有性生殖通过等位基因的分离、位于非同源染色体上的非等位基因的自由组合以及连锁基因的交换重组等过程为动物带来了巨大的遗传多样性,既提高了亲本生殖成功的机会,又有利于后代的生存。多数动物都以雌雄两种互朴的性别形式存在,那么,性别是怎样决定的呢?1性染色体决定性别自20世纪初发现某些生物体细胞内除含有成对的常染色体外,还有一对随性别不同组成也不同的性染色体。这对性染色体与性别决定直接相关,性染色体决定性别有以下两种形式:1.1XY型性别决定此类型在动物界很普遍,哺乳动物、双翅目昆虫、某些鱼类和某些两栖类的性别决定属于该类型。XY型性别决定是指雌性为同配性别,体细胞内含有两条X染色体,所产生的性细胞只有一种,仅含一条X染色体;雄性为异配性别,体细胞内含一条X染色体和一条Y染色体,产生两种性细胞,一种只含X染色体,一种只含Y染色体。如人的体细胞有46条染色体,其中22对为常染色体,一对为性染色体,男女之别在于女性性染色体是XX,男性性染色体为XY,婚后生男育女的概率各为1/2。生男育女完全决定于受精的精于所含的性染色体是X还是Y。XY型性别决定有一种特殊形式即XO型性别决定。McClong在1902年就发现蝗虫的性别决定属XO型。雌蝗虫是同配性别,只产生一种含X染色体的卵子。雄蝗虫为异配性别,只含一条X染色体而无Y染色体,产生两种精子,一种只含一条X染色体,一种不含性染色体,两者各占一半。受精卵有XX型(雌性)和XO(雄性)两种,雌雄比约为1:1。1.2ZW型性别决定鸟类、鳞翅目昆虫、某些鱼类、某些两栖类及某些爬行类属于该类型。此类型的雄性为同配性别,体细胞内有两个相同的Z染色体,仅产生一种含Z染色体的精子。雌性为异配性别,体细胞内含有Z和W两种性染色体,产生两种卵子,一种只含Z染色体,一种只含W染色体,二者各占一半。受精卵发育成的个体雌雄比约为1:1。ZW型性别决定也有一种特殊形式即ZO型性别决定。此类型的雄性为同配性别,体细胞内有两条相同的Z染色体,仅产生一种只含Z染色体的精子。雌性为异配性别,体细胞内仅含―条Z染色体而无W染色体,产生两种卵子,一种含有?条Z染邑体,―种不含性染色体,二者各占一半。受精卵有两种类型,ZZ型为雄性,ZO型为雌性,雌雄比例约为1:l。2环境条件决定性别性别靠其生活吏发育的早期阶段的某?时期的温度、光照或营养状况等环境条件来决定的情形称为环境条件决定性别。 许多寄生的甲壳类以幼虫到达寄主的先后顺序来决定性别。先到达寄主的个体长得较大,发育为雌体,后到达寄主的个体长得较小,发育成雄性。Stegophryxus是寄生在寄居蟹Pagurus上的等是类动物,幼虫附着在寄主腹部的发育成雌体,而落在雌体身上的幼虫发育成雄性,雄性和雌性相比,个体很小,以后一直生活在配偶的育囊中,经去除实验,将第一个落在寄主上预计发育成雌体的幼虫放在另外的雌体身上后,结果发育为雄体,从而证实其性别由环境决定。海产蠕虫后虫益的成熟雌虫产卵在海里,刚发育的幼虫没有性分化,之后自由生活的幼虫发育成雌虫,但是如果有机会落到雌虫的口吻上,性别未分化的幼虫就会发育成雄虫。如果把已经落在雌虫口吻上的幼虫移去,让其继续自由生活,就发育成中间性,畸形程度视呆在雌虫口吻上时间的长短。许多线虫是靠营养条件的好坏来决定性别的,它们一般在性别未分化的幼龄期侵入寄主体内,低感染率时营养条件好,发育成的成体基本上都是雌性,而高感染率时,营养条件差,发育成的成体通常都是雄的。大多数龟类无性染色体,经研究发现,其性别决定与温度有关。如乌龟卵在20―27℃条件下孵出的个体为雄性,在30―35C时孵出的个体为雌性。有少数龟类的卵如鳄龟科的啮龟卵在20℃的低温和30℃的高温条件下孵出的子代全为雌龟,在20~30'C之间的中间温度孵化,则子代全为雌龟。鳄类在30℃及以下温度孵化则全为雌性,32℃时雄性则占85%,雌鳄仅占15%,且孵化时在第2周到第3周的温度是胚胎的性别决定期。 我国特产的活化石扬子鳄靠光照强弱来实现性别决定。巢穴建于潮湿阴暗的弱光处可孵化出较多雌鳄,巢穴建于阳光曝晒处,则可产生较多的雄性。3染色体的单双倍数决定性别膜翅目昆虫属于此种类型,如蜜蜂的雄蜂由未受精的卵发育而成,只具有单倍的染色体数。雌蜂由受精卵发育而来,具有2倍的染色体数。营养条件的差异决定了雌蜂是发育成可育的蜂皇还是不育的工蜂。若整个幼虫期以蜂王浆为食,幼虫发育成体大的蜂皇。若幼虫期仅食2―2天蜂王浆,则发育成体小的工蜂。4性染色体与常染色体的比例决定性别果蝇的性染色体有X和Y两种,形式上与XY型性别决定相同,但X和Y在性别决定中所起的作用不同,X染色体的数目与常染色体(AA)之间的比例才是性别的决定因素。XX:AA为1:1时为雌蝇,XX:AA为l:2为雄蝇。性成熟果蝇的Y染色体在精子发育过程中有重要意义,但在早期的性发育过程中并不重要。5多基因决定性别该类型性别决定是指性染色体X和Y包含主要的雌性和雄性决定基因,在常染色体上含有次要的性别决定基因,性别不仅仅由性染色体决定。通常,常染色体基因保持平衡,使性别决定依照性染色体机制进行,但在某些个体,常染色体可能重新组合,导致某一性别的常染色体因素过剩,使性染色体机制无效,,有人指出,雌雄异体鱼类的性别决定包含多个基因,当决定雄性的基因总量超过决定雌性基因的总量时,合子将是雄性,反之亦然,剑尾鱼、青锵、搏鱼和多种罗非鱼等均属于这种类型的性别决定。6性反转在一定条件下,动物的雌雄个体相互转化的现象称为性反转。早在2000多年前的《汉书》中就有母鸡司晨的记载。鱼类的性反转是比较常见的,如黄鳝的性腺,从胚胎到性成熟是卵巢,只能产生卵子。产卵后的卵巢慢慢转化为精巢,只产生精子。所以,每条黄鳝一生中都要经过雌雄两个阶段。成熟的雌剑尾鱼会出其不意地变成雄鱼,老的雌鳗鱼有时转变成雄鱼。大量研究表明,外源激素可起到性逆转作用,用甾类激素在性腺性分化的关键时期处理仔、稚鱼,可得到单性或原发单性种群。从动物的种类看,成年的鱼和蛙能在激素或其它因素影响下转变性别,鸡也有“牝鸡司晨”现象,且可用激素使性未分化的鸡胚转变性别。哺乳类包括人在内成体均不能转变性别,但在胚胎尚未性分化时如给以性激素可使胚胎发生雌雄同体现象。其原因一方面是由于进化上的不同,但更主要的是鱼和蛙及雌鸡和鸡胚内部都存在着性别转化的物质条件――生殖腺存在着尚未分化的部分,所以在条件适宜时可以转变性别,而雄鸡和成年哺乳类则无此构造,在两性尚未分化以前的哺乳类胚胎是否有可能转变,尚需进一步研究。14鱼类的性别决定及性逆转鱼类性别的表达方式是多种多样的,其中主要是由染色体所决定的遗传性别(Genetic sex)和由遗传性别控制下通过个体发育而形成的生理性别(Physiological sex)所构成。鱼类的遗传性别取决于受精时来自精卵的染色体。大多数鱼类体内仅存精巢或卵巢,属雌雄异体(G onochorism)。有些鱼类还存在着由种质特性所决定的自然的性别转化现象--性逆转(Sex reversal)。黄鳝(monopterus albus)黄鳝性别明显与体长和年龄有关。中小个体主要是雌性,较大个体主要是雄性。15胚胎学原理 :胚胎发育早期的生殖腺都由皮质部和髓质部构成,无性别分化。这时的生殖腺具有很强的可塑性,具有向雌性或雄性发育的潜能,如果皮质部得到发育,髓质部就退化,发育成雌性的卵巢;如果髓质部得到发育,皮质部退化,就发育成雄性的精巢。 16影响皮质部、髓质部发育的因素主要有:1.遗传因素:2.激素:性类固醇激素对鱼类性别的影响是显著的。雌二醇可使遗传上雄性青转变成功能上雌鱼;甲基睾酮可使遗传上雌鱼转变为功能上的雄鱼。3.环境因素,如温度:银汉鱼受精卵在17~25℃水温发育,雌体占12%,而在11~19℃发育,雌体占75%。17鱼类性别的人工控制就是根据生产要求,通过人工手段,将遗传型的雌性或雄性,转变为表现的雄性或雌性,或诱导中性不育。其控制途径主要有以下几条:18性激素处理用性激素处理使鱼类性别从遗传型雌性向表现型雄性逆转中使用最广、效果稳定而有效的药物是17-α-甲基睾甾酮(17-α-methyme-stosterone);从遗传型雄性向表现型雌性逆转中有效可行的雌激素为17-β-雌二醇(17-β-estraliol)19激素的作用类固醇激素是各种生殖现象的诱导者,首先诱导性腺分化,然后通过性腺的活动使鱼体的外部形态、内部结构、生理性状和生态行为表现出来。20激素处理方法
投喂、浸泡、注射、埋植21种间杂交:通过种间杂交以获得单一性别的群体进行单性养殖,这种方法主要集中在罗非鱼属内。此方法能得到全雄或大部分雄性鱼。 机制:罗非鱼中存在ZW♀-ZZ♂(奥尼罗非鱼)和XX♀-XY♂(尼罗罗非鱼)的性别遗传机制,两种罗非鱼杂交亲本,雌雄鱼都是同型配子(ZZ♂-XX♀)就能产生100%的雄性后代。这种理论所推测的后代应100%是雄性,但实际上雄性一般只有95%左右。一种解释认为罗非鱼的性别决定除性染色体外,也与常染色体有关;另一种解释认为是引进的罗非鱼不纯而产生的。22种间杂交尼罗罗非鱼♀(XX)×奥利亚罗非鱼♂(ZZ)子代(XZ)为100%雄鱼22褐牙鲆用灭活真鲷精子刺激后,雌核发育获得全雌鱼(XX)。雌核发育雌鱼(XX)经温度诱导成生理雄鱼(XX)。雌核发育雌鱼(XX)×生理雄鱼(XX)全雌牙鲆(XX)23人工诱导雌核发育
雌核发育是由同种或异种精子进入卵内,起诱发作用,不参与发育,卵子完全在雌核控制下发育成子代的一种生殖方式。人工诱导雌核发育,就是用经γ射线或紫外线照射的遗传上失活的精子进入未受精的卵内,从而激活卵子在雌核控制下进行发育。对于XX-XY型性染色体的鱼类来说,产生全部雌性的后代。这些后代的性状纯属母系遗传,基因型是高度纯合的。伪雄(XX型雄)个体的培育:将经紫外线照射去核的泥鳅精液与金鱼卵混合受精,诱发雌核发育。在22℃下接触水5 min后,低温处理(0℃,30 min)卵,使其单倍体二倍体化。这种在遗传上都是雌性(XX)的卵,在孵化后20~80天内,投喂添加50 ug/g甲基睾酮的饵料,所获得的雄性,全为伪雄个体,产生的精子全是X型。超雄(YY)个体的培育:γ射线照射金鱼卵,使其细胞核在遗传上失去作用,然后立即用精子受精,诱导雄核发生。在22℃下,接触水45 min,将卵用高温处理(40℃,1 min),使其二倍体化。所获得的雄性,全部是超雄个体,只产生Y精子。24三系配套技术原系
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