亚慢性阿维菌素中毒对王鸽脑神经递质影响机制的研究--《东北农业大学》2014年博士论文
亚慢性阿维菌素中毒对王鸽脑神经递质影响机制的研究
【摘要】：阿维菌素(avermectin, AVM)是一种具有抗寄生虫活性的广谱抗生素,在农牧业生产中被广泛应用于驱杀农业害虫与家畜体内外的寄生虫,因此,AVM在环境中的蓄积也随之增多。过量摄入可造成人和动物严重的神经系统损害,其毒性作用机制日益受到研究者们的关注。鸽子是用于监测生态环境变化的首选生物之一,故本课题以王鸽为研究对象,建立王鸽亚慢性中毒模型,观察了王鸽AVM中毒的临床症状、病理组织学结构,检测了王鸽脑组织中氨基酸类神经递质含量及DNA甲基化水平、氨基酸类神经递质受体、炎症因子、甲基转移酶和去甲基化酶基因mRNA的表达情况,探讨AVM中毒对王鸽脑组织的影响及其毒性机制,为进一步研究AVM对鸟类的影响提供可靠的数据资料,并为保护生态环境和促进畜牧业发展提供科学参考。
将2月龄健康美国王鸽96只,随机分为4组,每组24只,雌雄各半。试验王鸽自由采食和饮水,采用阶梯式笼养方式,严格按照王鸽的饲养管理标准进行饲养。染毒方式采用给王鸽饲喂含有不同剂量AVM的日粮(对照组饲喂不含AVM的全价日粮、低剂量组20mg/(kg-diet)、中剂量组40mg/(kg-diet)、高剂量组60mg/(kg-diet)的方法染毒,复制王鸽亚慢性AVM中毒模型。在染毒后的第30d、60d、90d分别剖杀试验王鸽,仔细分离王鸽的脑组织,留取大脑、小脑、视叶组织标本,用于病理学观察、神经递质及炎症因子等指标的检测。应用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography, HPLC)检测脑组织中Y-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)、甘氨酸(Glycine, Gly)、谷氨酸(Glutamicacid,Glu)、天冬氨酸(Aspartic acid,Asp)四种氨基酸类神经递质含量及DNA甲基化水平,通过实时荧光定量PCR法检测脑组织中氨基酸类神经递质受体γ-氨基丁酸A受体(gamma-aminobutyric acid A receptor, GABAAR)、γ-氨基丁酸B受体(gamma-aminobutyric acid B receptor, GABABR)、N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-Aspartate, NMDA)受体亚型NR1、NR2A、NR2B受体、炎症因子包括诱导型一氧化氮合酶(cytokine inducible-NOS, iNOS),核转录因子-κB (Nuclearfactor κB, NF-κB),前列腺素E合酶(prostaglandin E synthase, PGES),甲基转移酶(DNA methyltransferases, DNMT) DNMT1、DNMT3A、DNMT3和去甲基化酶(demethylase, MBD2)的基因mRNA表达。研究结果如下：
1.病理学观察表明,王鸽脑组织HE染色发现,与对照组相比,AVM染毒组的大脑、小脑和视叶组织的结构混乱,大脑组织主要表现为：神经元周围间隙及小血管间隙增宽；神经纤维走行紊乱,神经元肿胀,细胞质增加,神经元空泡化以及胞核浓缩。小脑、视叶组织与大脑表现相似。此外,小脑还出现了浦肯野细胞质空泡化,颗粒层细胞松散,颗粒细胞的细胞核的浓缩或破裂,结构混乱,松散,神经纤维间的间隙增大。超微结构的观察表明：与对照组相比,AVM染毒可导致大脑、小脑和视叶组织的超微结构破坏。大脑组织主要表现为核膜不完整;在核膜或核孔分布着浓缩不均匀的染色质；线粒体肿胀,线粒体嵴破坏,溶解和空化。视叶和小脑组织的超微结构改变与大脑相似。证实AVM暴露不仅引起王鸽神经系统损害的临床症状,而且可导致鸽脑的组织学改变,鸽脑多部位的神经细胞超微结构损害明显。
2.优化了王鸽脑组织中氨基酸类神经递质含量及DNA甲基化水平的高效液相色谱检测方法。氨基酸含量检测优化条件为：色谱柱：Diamonsil C18(4.6mm×200mm,5μm);检测波长：350nm；流动相：A为0.05mol/L的醋酸钠缓冲液(NaAc,pH=5.8),B为乙腈-水(1：1,V/V),梯度洗脱程序B由初始时的13%经10min至48%,18min至85%；流速：1.0ml/柱温为20℃；取10μ1进样分析。DNA甲基化水平检测优化色谱条件如下：色谱柱为DIKMA SpursilC18-EP (250mm×4.6mm5μm);紫外检测波长280nm；流动相是甲醇和0.05mo1/L磷酸二氢钾(10：90,V/V,pH3.5)；流速为1.0mL/min,上样量20μL。均采用外标定量,紫外检测。后续结果表明本方法快速、准确、简单、灵敏度高、重复性好。
3.氨基酸类神经递质含量检测结果表明AVM染毒后四种氨基酸神经递质Asp、Glu、Gly、GABA含量均增高(P0.05),染毒组中GABAAR、GABABR、NR1、NR2A、NR2B基因mRNA表达量与对照组比较也显著升高(P0.05),随着染毒剂量的增加,Asp、Glu、Gly、GABA含量均呈逐渐增高趋势(P0.05),GABAAR、GABABR、NR1、NR2A、NR2B基因表达量也具有相同的变化趋势。大脑、小脑、视叶组织变化趋势相似,其中大脑组织中氨基酸类神经递质含量及其受体基因表达量升高最明显。这种改变与AVM暴露的时间与剂量具有一定的量效关系。表明AVM暴露造成王鸽脑组织四种氨基酸类神经递质含量增高,其受体基因的mRNA表达增强,可能是AVM的神经毒性的机制之一。
4.AVM染毒后导致王鸽脑组织DNA总甲基化水平降低,甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、 DNMT3B基因mRNA表达量降低和去甲基化酶MBD2基因mRNA表达量升高,与对照组比较具有统计学意义(P0.05),大脑、小脑、视叶具有相同的变化趋势。随着染毒剂量的增加DNMT1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA表达量呈逐渐降低趋势(P0.05),MBD2基因mRNA表达量呈逐渐增高趋势(P0.05)。这种改变也与AVM暴露的时间与剂量具有一定的效应关系。表明AVM中毒引起王鸽脑组织损伤与DNA总甲基化水平降低有关。
5.AVM染毒后对大脑、小脑、视叶中iNOS、NF-κB、PGES基因的mRNA表达量的影响相似,在30d,其基因的mRNA表达量以剂量依赖的方式逐渐增加(P0.05),但是,在60d、90d时间点,其基因的1mRNA表达量显示的是先上升然后下降的趋势(P0.05)。在小脑和视叶,这些炎症因子的表达量表现出类似的趋势。但不同脑区在不同的时间点其变化的水平有所不同。提示炎症基因iNOS、NF-κB、PGE参与了AVM致脑组织毒性损害过程。
综上所述,AVM染毒后大脑、小脑、视叶组织均受到损伤,这种影响最显著的是大脑,表明大脑可能是AVM中毒损伤的主要部位之一。本试验从病理形态学的光镜和电镜观察,脑组织氨基酸类神经递质含量及相关受体基因的表达,炎症因子基因表达,DNA甲基化水平及其甲基转移酶和去甲基化酶的基因表达等指标的检测,探讨并丰富了AVM的神经毒性作用机制。
【关键词】：
【学位授予单位】：东北农业大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2014【分类号】：S859.82【目录】：
摘要10-12Abstract12-151 前言15-46 1.1 AVM的研究概况15-21
1.1.1 AVM的理化性质15-16
1.1.2 AVM的药理学与毒理学特征16-18
1.1.3 AVM中毒致神经系统损害的组织病理学研究18-19
1.1.4 AVM对脑细胞代谢酶影响的研究19-20
1.1.5 AVM诱导神经细胞凋亡的研究20-21 1.2 氨基酸类神经递质与中枢神经系统损害的研究21-26
1.2.1 氨基酸类神经递质概述21
1.2.2 氨基酸类神经递质改变与CNS疾病21-23
1.2.3 氨基酸类神经递质改变与中毒性疾病23-26 1.3 氨基酸类神经递质受体与中枢神经系统疾病的研究26-35
1.3.1 GABAA受体与中枢神经系统损害概述26-29
1.3.2 GABAB受体与中枢神经系统损害概述29-31
1.3.3 NMDA受体与中枢神经系统损害概述31-35 1.4 炎症因子概述35-39
1.4.1 一氧化氮36
1.4.2 前列腺素36-37
1.4.3 核转录因子37
1.4.4 炎症因子与药物、疾病37-39 1.5 DNA甲基化概述39-44
1.5.1 DNA甲基化影响基因的表达39
1.5.2 DNA甲基化相关的酶类39-40
1.5.3 DNA甲基化与疾病40-41
1.5.4 药物毒物对DNA甲基化的影响41-44 1.6 实验目的与意义44-462 材料与方法46-54 2.1 试验材料46-48
2.1.1 试验动物分组与处理46
2.1.2 试验仪器设备46-47
2.1.3 试验试剂47-48 2.2 试验方法48-53
2.2.1 动物的临床观察48
2.2.2 病理学检查48-49
2.2.3 HPLC法检测脑组织中氨基酸类神经递质含量49-50
2.2.4 HPLC法检测脑组织中DNA总甲基化水平50-51
2.2.5 qPCR法检测目的基因mRNA表达水平51-53 2.3 试验数据的分析与统计53-543 结果与分析54-68 3.1 临床表现54 3.2 AVM对脑组织形态学影响的检测结果54-57
3.2.1 光镜下的组织学观察结果54-55
3.2.2 电镜下超微结构的观察结果55-57 3.3 氨基酸类神经递质与DNA甲基化检测方法的建立与优化57-59
3.3.1 HPLC检测氨基酸类神经递质含量方法的建立57-58
3.3.2 HPLC法检测DNA甲基化方法的建立58-59 3.4 脑组织中氨基酸类神经递质及其受体检测结果59-64
3.4.1 脑组织中GABA含量的检测结果59-60
3.4.2 脑组织中Gly含量的检测结果60
3.4.3 脑组织中Glu含量的检测结果60-61
3.4.4 脑组织中Asp含量的检测结果61
3.4.5 脑组织中GABAAR mRNA表达量的检测结果61-62
3.4.6 脑组织中GABABR mRNA表达量的检测结果62
3.4.7 脑组织中NR1 mRNA表达量的检测结果62-63
3.4.8 脑组织中NR2A mRNA表达量的检测结果63
3.4.9 脑组织NR2B mRNA表达量的检测结果63-64 3.5 脑组织中DNA甲基化及甲基化酶的检测结果64-66
3.5.1 脑组织中DNA总甲基化的检测结果64
3.5.2 脑组织中DNMT1 mRNA表达的检测结果64-65
3.5.3 脑组织中DNMT3A mRNA表达的检测结果65
3.5.4 脑组织中DNMT3B mRNA表达的检测结果65
3.5.5 脑组织MBD2 mRNA表达的检测结果65-66 3.6 脑组织中炎症因子mRNA表达量的检测结果66-68
3.6.1 脑组织中PGES mRNA表达量的检测结果66
3.6.2 脑组织中iNOS mRNA表达量的检测结果66-67
3.6.3 脑组织中NF-κB mRNA表达量的检测结果67-684 讨论68-78 4.1 AVM中毒的临床表现及脑组织病理学变化68-69 4.2 AVM对脑组织中氨基酸类神经递质及其受体的影响69-72
4.2.1 AVM对脑组织中抑制性氨基酸类神经递质及其受体的影响69-71
4.2.2 AVM对脑组织中兴奋性氨基酸类神经递质及其受体的影响71-72 4.3 AVM诱导王鸽脑组织炎症损伤72-74 4.4 AVM中毒对脑组织中DNA总甲基化及其酶的影响74-785 结论78-79致谢79-80参考文献80-97附录97-113索引113-115攻读博士学位期间发表的学术论文115
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【参考文献】
中国期刊全文数据库
孟春风;戴冬秋;郭科军;;[J];癌症;2008年12期
郭杰,郭岩,雷翠萍,毕晓颖,邢程,李志超;[J];吉林大学学报(医学版);2004年03期
周良生;李术;朱蓓蕾;沈建忠;;[J];东北农业大学学报;2009年02期
王海宏,谢忠忱,蔡辉益;[J];动物营养学报;2003年01期
陶涛;陈伟杰;潘洪富;李斌;廖志钢;;[J];法医学杂志;2007年02期
张舒;官大威;王玲;王华新;张国华;赵锐;范琰琰;;[J];法医学杂志;2011年06期
刘海燕;袁洪;黄志军;阳国平;;[J];中国临床药理学杂志;2012年02期
苏洁慧;雷艳梅;罗洁元;;[J];广东医学;2013年04期
柯珂;朱燕;乔琰;彭光银;徐钱;杨旭;;[J];环境科学学报;2007年02期
任锐;李本长;郑晶;陆艳;甘铁儿;;[J];环境与健康杂志;2009年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
周建孟;袁建辉;姬娜娜;刘建军;庄志雄;;[J];癌变.畸变.突变;2009年03期
胡洁;王全凯;董琳;孙金秀;谢广云;王健;许建宁;;[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
蒋书东,章孝荣,李福宝,方富贵,张丽霞;[J];安徽农业科学;2005年05期
董玉瑛;张阳;郭幸丽;李丹;郝苗;;[J];安徽农业科学;2008年06期
马宜明,李俊,金涌;[J];安徽医药;2003年01期
李剑欣,张绪梅,徐琪寿;[J];氨基酸和生物资源;2005年03期
王芳权;陈蔚青;陈虹;;[J];氨基酸和生物资源;2006年02期
周靖;陈军芳;;[J];北方药学;2012年01期
宋亚军,孙勤枢,王鲁克,王宁,谢敏豪;[J];北京体育大学学报;2005年04期
张沙骆;瞿树林;陈嘉勤;;[J];北京体育大学学报;2008年12期
中国重要会议论文全文数据库
付守芝;张友恩;孔明;陈华靖;李红;;[A];第二届全国药物性损害与安全用药学术会议——抗感染药物不良反应与临床安全应用专题研讨会论文汇编[C];2010年
张志祥;程东美;徐汉虹;;[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年
罗斌;唐启盛;司银楚;侯秀娟;徐向青;;[A];2005全国中医脑病学术研讨会论文汇编[C];2005年
苏娟;王生兰;黄玉珊;姜怡邓;王树人;;[A];达能营养中心青年科学工作者论坛优秀论文集2009年第1期[C];2009年
宁初光;唐青涛;黄延盛;吴小勇;;[A];“食品工业新技术与新进展”学术研讨会暨2014年广东省食品学会年会论文集[C];2014年
丁毅;;[A];2014全国遗传学理论与实验教学研讨会会议手册及论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库
李虹霖;[D];黑龙江中医药大学;2010年
吴敏;[D];南京理工大学;2010年
胡华锋;[D];华中农业大学;2011年
林芸;[D];南方医科大学;2011年
胡军和;[D];西北农林科技大学;2011年
王永侠;[D];浙江大学;2011年
林耀棠;[D];成都中医药大学;2001年
魏群利;[D];南京中医药大学;2001年
徐放明;[D];南京中医药大学;2001年
高天君;[D];第四军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库
刘辉;[D];安徽工程大学;2010年
张红娟;[D];郑州大学;2010年
张华永;[D];山东农业大学;2010年
刘伟;[D];安徽农业大学;2010年
侯魁元;[D];黑龙江中医药大学;2010年
钟美蓉;[D];承德医学院;2010年
陈志恒;[D];山东中医药大学;2010年
吴长兴;[D];浙江大学;2010年
雷恒;[D];武汉工业学院;2010年
丁晓倩;[D];石河子大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
王洁如,李小玲,范松清,谭琛,向娟娟,唐珂,王蓉,李桂源;[J];癌症;2003年09期
李建华,石先哲,刘敏,王彦,于志红,许国旺,吕申;[J];癌症;2005年03期
王溪;朱卫国;;[J];癌症;2008年10期
王玉琴;贾彦博;朱顺达;芮昶;;[J];现代农业科技;2009年17期
曹哲明;丁炜东;俞菊华;曹丽萍;吴婷婷;;[J];动物学报;2007年06期
戴军,陈玉林,葛绳德,方之扬;[J];第二军医大学学报;1999年04期
孟辉,冯华,王宪荣;[J];第三军医大学学报;2001年07期
龙冬梅,曹波,赵青,胡冉;[J];第三军医大学学报;1997年04期
王晓明,臧益民,龚卫琴,高峰,李源,高桥信之,岡田泰伸;[J];第四军医大学学报;2004年09期
官大威;李如波;王华新;王玲;赵锐;汪德文;姜兆林;朱昱;王明会;解鹏;董万营;;[J];中国法医学杂志;2007年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库
艾国良,曾元根;[J];经济动物学报;2002年03期
唐余能;;[J];农村实用技术;2006年02期
原爱平;任晋东;卢立志;沈文良;张昊;尹兆正;;[J];浙江农业科学;2009年05期
徐善金;张宏宽;辛卫;张大伟;陈卫彬;卜柱;童海兵;何宗亮;;[J];中国饲料;2012年06期
丁香;;[J];农村百事通;2012年12期
范多文;[J];江西农业科技;1986年01期
范多文;[J];农业科技通讯;1986年09期
岑德光;;[J];养禽与禽病防治;1986年03期
林明基;尹旺秋;;[J];养禽与禽病防治;1987年06期
沈秋姑;苏州;;[J];江西畜牧兽医杂志;1990年01期
中国重要会议论文全文数据库
刘进国;邹晓庭;李慧;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
高鹏飞;赵慧婷;曹果清;张桂贤;姜玉锁;王钦德;;[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
屠云洁;苏一军;陈宏生;高玉时;王华如;;[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
谢鹏;邹晓庭;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年
刘进国;邹晓庭;李慧;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
刘进国;邹晓庭;李慧;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库
张华东;[N];江苏科技报;2002年
苏舟;[N];无锡日报;2008年
张晓丹;[N];山西科技报;2002年
陆新刚?通讯员
万峰;[N];孝感日报;2008年
;[N];中国畜牧兽医报;2007年
;[N];中国畜牧兽医报;2008年
;[N];中国畜牧兽医报;2009年
张大仓;[N];中国畜牧水产报;2001年
燕平;[N];中国畜牧兽医报;2012年
林忠宣;[N];中国畜牧水产报;2001年
中国博士学位论文全文数据库
陈立杰;[D];东北农业大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库
瞿健萍;[D];东北农业大学;2014年
由天姿;[D];东北农业大学;2012年
原爱平;[D];浙江大学;2010年
贾琳琳;[D];东北农业大学;2011年
周坤;[D];扬州大学;2013年
贾晓旭;[D];南京农业大学;2009年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号阿维菌素片-天下鸽问-
问题搜索：
& &　问题搜索
回答数：19&&提问时间： 21:57:57
放在水槽里行吗
回答数：5&&提问时间： 21:50:39
回答数：4&&提问时间： 21:06:52
各位前辈：阿维菌素片是兽药还是人药？
回答数：10&&提问时间： 22:55:41
共4条 1/1转到
问题搜索：
中国信鸽信息网 All Rights Reserved
中国.深圳 电话：8、 传真：8
《中华人民共和国增值电信业务经营许可证》百度拇指医生
&&&普通咨询
您的网络环境存在异常，
请输入验证码
验证码输入错误，请重新输入}