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维生素A的测定方法
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& && &维生素A的测定方法：三氯化锑比色法 & && &1．原理& && &维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该蓝色物质虽不太稳定，但在一定时间内可用分光光度计在620 nm波长处测定其吸光度。& && &本法适用于维生素A含量较高的各种样品(高于5～10肚g／g)，对低含量样品，因受其他喈溶性物质的干扰，不易比色测定。该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差。比色测定必须在6 min内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。& &&&2．仪器& & ①分光光度计。& & ②回流冷凝装置。& & 3．试剂& & (本实验所用试剂均为分析纯，水均为蒸馏水)& & ①无水硫酸钠：不吸附维生素A。& & ②乙酸酐。& & ③无水乙醚：不含过氧化物。& & 检查方法；取5 mL乙醚加1 mL 10％碘化钾溶液，振摇1 rain，如含过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色；或加入4滴0．5％淀粉溶液，水层呈蓝色。去除方法：重蒸乙醚时，瓶内放人少许铁末或纯铁丝。弃去10％初馏液和10 9／6残留液。& & ④无水乙醇：不含醛类物质。& & 检查方法：在盛有2 mL银氨溶液的小试管中，加入3～5滴无水乙醇，摇匀，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中含有醛。& & 脱醛方法：取2 g硝酸银溶于少量水中。取4 g氢氧化钠溶于温热乙醇中。将两者倾入盛有l L乙醇的试剂瓶内，振摇后，暗处放置两天(不时摇动，促进反应)。取上清液蒸馏，弃去初馏液50 mL。若乙醇中含醛较多，可适当增加硝酸银用量。& & ⑤三氯甲烷：应不含分解物，否则会破坏维生素A。& & 检查方法：取少量三氯甲烷置试管中，加水少许振摇，加几滴硝酸银溶液，若产生白色沉淀，则说明三氯甲烷中含有分解产物氯化氢。& & 处理方法：置三氯甲烷于分液漏斗中，加水洗涤数次，用无水硫酸钠或氯化钙脱水，然后蒸馏。& & ⑥25 9／6三氯化锑一三氯甲烷溶液：将25 g干燥的三氯化锑迅速投入装有100 mI一三氯甲烷的棕色试剂瓶中，振摇，使之溶解，再加入无水硫酸钠10 g。用时吸取上层清液。& & ⑦1：1氢氧化钾溶液。& & ⑧O．5 tool·L叫氢氧化钾溶液。& & ⑨酚酞指示剂：用95％乙醇配制l％的溶液。& & ⑩维生素A标准溶液：视黄醇(纯度85％)或视黄醇乙酸酯(纯度90％)经皂化处理后使用。取脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1 mg／mI．视黄醇。临用前以紫外分光光度法标定其准确浓度。& & 标定：取维生素A标准溶液10．0 pI。，用乙醇稀释至3．00 mI。，在325nm波长处测定其吸光值。用此吸光值系数计算维生素A的浓度。& & —__& & 1& & 0 nn& & 浓度计算：x一丁惫×高x参昙嵩与& & 式中：X——维生素A的浓度，g·mI．～；& & 万一一维生素A的平均紫外吸光值；& & 】835——维牛素A(1％)比吸光系数；&&S_加入维生素A标准液的量，牲L；& & 口nn& & ≤箫——维生素A标准液稀释倍数。& & 4．测定步骤& & ①样品处理：因含有维生素A的样品，多为脂肪含量高的油脂或动物性食品，故必须首先除去脂肪，把维生素A从脂肪中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法。& & A．皂化法& & a。皂化：称取0．5～5 g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入10 mI。l：<font color="#氢氧化钾及20～40 mL乙醇，在电热板上回流30 min。加人10 mI。水，稍稍振摇，若无混浊现象，表示皂化完全。& & b．提取：将皂化液移人分液漏斗。先用30 mI。水分两次冲洗皂化瓶(如有渣子，用脱脂棉滤入分液漏斗)，再用50 mI。乙醚分两次冲洗皂化瓶，所有洗液并人分液漏斗中。振摇2 min(注意放气)，提取不皂化部分。静置分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用约30 mI。乙醚分两次冲洗，洗液倾人第二分液漏斗，振摇后静置分层，将水层放入第三分液漏斗，醚层并入第一分液漏斗。如此重复操作，直至醚层不再使三氯化锑一三氯甲烷溶液呈蓝色为止。& & c．洗涤：在第一分液漏斗中加入30 mI。水，轻轻振摇，静置片刻后，放去水层。再加入<font color="#～20 mI一0．5 mol·L叫的氢氧化钾溶液，轻轻振摇后，弃去下层碱液(除去醚溶性酸皂)。继续用水洗涤，每次用水约30 mI。，直至洗液不再使酚酞变红为止(大约洗涤3次)。醚液静置<font color="#～20 min后，小心放掉析出的水。& & d．浓缩：将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25 mI。乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并人三角瓶内。用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5 mI。乙醚时取下。减压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷(约5 mI。左右)，使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内(3～5肛g·mI。一’)。& & B．研磨法(此法适用于测定维生素A含量大于5～10 tLg／’g的样品，如肝样品。该法步骤简单，省时，结果准确)& & a．研磨：精确称取2～5 g样品，放人盛有3～5倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。& & b．提取：小心地将全部均质化样品移人带盖的三角瓶内，准确加人50～lOO mI，乙醚。紧压盖子，用力振摇2 min，使样品中维素A溶于乙醚中。使其自行澄清(大约需1～2 h)，或离心澄清(注意：因乙醚易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙醚的试剂瓶也应事先置于冷水浴中)。& & ②标准曲线的绘制：准确吸取维生素A标准溶液0．o，O．1，0．2，O．3，O．4，O．5 mI。于6个<font color="# mI一容量瓶中，用三氯甲烷定容，得标准系列使用液。再取6个3 cm比色皿顺次移人标准系列使用液各1 mI。，每个皿中加乙酸酐l滴，制成标准比色列。在620 nm波长处，以10 mI。三氯甲烷加1滴乙酸酐调节光度至零点。然后将标准比色系列按顺序移到光路前，迅速加入<font color="# mL 25％三氯化锑一三氯甲烷溶液，于6 s内测定吸光度(每支比色皿都在临测前加人三氯化锑一三氯甲烷溶液)。以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。③样品测定：取二个3 cm比色皿，分别加入1 mL三氯甲烷(样品空白液)和1 mL样品溶液，各加1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。分别测定样品空白液和样品溶液的吸光度，从标准曲线中查出相应的维生素A含量。& & 5．计算& & x=：=寻×Vx揣& & 77Z& & 1 UUU& & 式中：X——样品中维生素A的量，mg·(100 g)～；& & c——由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，肛g·mL_。；& & 印一一由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，弘g·mL～；& & 优——样品质量，g；& & 、厂一样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，mL；& & }器——将样品中维生素A由弘g／g折算成mg／100 g的折算系数。& & 如按国际单位，每1国际单位一o．3 pg维生素A。& & 6．说明& & ①乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。& & ②所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。& & ③由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常6 s以后便开始退色，因此要求反应在比色皿中进行，产生蓝色后立即读取吸光值。& & ④维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。& & ⑤三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。& &&&资料来源：国家标准物质网资料中心
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维生素A的测定——三氯化锑比色法（三）
【来源/作者】国家标准物质网 【更新日期】 14:41:04
X=（c﹣c0）/m×V×（100/1000）&
式中：X——样品中维生素A的量，mg·(100&g) -1；
&&&c——由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，&g·mL-1；
&&&c0一一由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，&g·mL-1；
&&&m——样品质量，g；
&&&V一样品提取后加入定容之体积，mL；
&&&& &100/1000——将样品中维生素A由弘g／g折算成mg／100&g的折算系数。
如按国际单位，每1国际单位=0.3&g维生素A。
①乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。
②所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。
③由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常6s以后便开始退色，因此要求反应在比色皿中进行，产生蓝色后立即读取吸光值。
④维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。
⑤三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。
【关键词】三氯甲烷 氯仿&
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维生素A和维生素E的化学检验方法？
用化学方法鉴别Va和Ve
用化学方法、GC、MS的全都弱爆了，什么IR、HPLC、UV
我有更好的答案
第一篇　高效液相色谱法
　　2　原理
　　样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A和维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。最小检出量分别为VA：0.8ng；α－E：91.8ng；γ－E：36.6ng；δ－E：20.6ng。
　　3　试剂
　　实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。
　　3.1　无水乙醚：不含有过氧化物。
　　3.1.1　过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL 10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。
　　3.1.2　去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。
　　3.2　无水乙醇：不得含有醛...
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