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HPLC法测定黄连及炮制品中4种生物碱的含量
摘　要：目的：测定10个省市市售黄连及8种炮制品中4种生物碱的含量。方法：采用Phenomoil-C18 BDS（250 mm×4.6mm,5μm）色谱柱;流动相为乙腈-水（45∶55,内含磷酸二氢钾0.34 g,十二烷基硫酸钠0.17 g）;检测波长：345流速：1.0 mL/柱温：25℃。结果：盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱和盐酸药根碱4种生物碱可以完全分离,不同炮制品生物碱含量的顺序为酒制、醋制、姜制、萸制、土制、胆制、盐制和炭制。结论：本法灵敏度高,重现性好,可用于黄连等含小檗碱型生物碱中药材及制剂的质量控制。
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黄连HPLC数字化指纹图谱研究及7种生物碱含量测定
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盐酸小檗碱含量测定方法概述
&&&&&&本期共收录文章20篇
　　[摘要] 本文简要概述了盐酸小檗碱含量测定方法。通过查阅中国期刊全文数据库（CNKI）和维普全文数据库的相关文献资料，对盐酸小檗碱的6种含量测定方法加以归纳综述，为盐酸小檗碱含量测定方法的进一步应用研究提供参考。 中国论文网 /6/view-2476571.htm　　[关键词] 盐酸小檗碱； 含量测定； 方法 　　[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] （2010）11（c）-141-02 　　 　　盐酸小檗碱为抗菌药，主要用于志贺菌属、霍乱弧菌等敏感病原菌所致的胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染。盐酸小檗碱为《中国药典》收载品种，含量测定《中国药典》2005年版二部对其原料药采用容量法，制剂采用高效液相色谱法，有效地控制了该药的质量。盐酸小檗碱常制成各种复方制剂和多种剂型广泛应用于临床。对盐酸小檗碱及其复方制剂中盐酸小檗碱含量测定方法研究的文献较多，现就近年来研究的含量分析方法作一概述。 　　1 紫外-可见分光光度法（UV） 　　UV法由于具有灵敏度和精密度较高，操作简便、快速等特点，广泛用于各种药物制剂的分析中。贺子华[1]分别采用容量法、UV法和高效液相色谱法（HPLC）对盐酸小檗碱片进行含量测定，经三种方法对样品进行分析比较，认为容量法测定含量结果均符合规定；HPLC法分析盐酸小檗碱片中含有其他生物碱的量较多，盐酸小檗碱的量较少；但采用UV法测定盐酸小檗碱片的含量方法较为简便，专属性强。 　　2 二阶导数光谱法（SDS） 　　SDS是解决干扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高光谱分辨率的一种数据处理技术，常用于药物分析中。崔颖等[2]探讨SDS测定芪黄颗粒中小檗碱的含量，采用SDS，利用小檗碱在351.0 nm和363.6 nm（谷-峰）处振幅D值与浓度C值的关系（C=131.27D＋0.090 5，r=0.999 9）计算其含量。结果对照品溶液和供试品溶液在351.0 nm和363.6 nm处均出现谷－峰振幅，而阴性对照液在此处振幅约为零，不影响小檗碱的测定，扫描速度240 nm/min，狭缝宽度2 nm，△λ＝3 nm，平均加样回收率为100.3%，RSD为0.73%，导数测定过程中改变△λ，振幅D值则发生改变，该法采用对照品对照法，对照品及样品的振幅D值同时改变，但其比值不变，故对实验结果无影响。徐英瑜等[3]建立SDS测定葛根芩连微丸中盐酸小檗碱的含量，采用SDS，以无水乙醇为溶剂，测定波长分别为365 nm和274 nm，扫描速度40 nm/min。结果在365 nm处，盐酸小檗碱有一最大振幅，其他样品及基质在此处的二阶导数光谱与零线几乎重合，不影响盐酸小檗碱含量的测定，盐酸小檗碱在4～12 μg/ml浓度范围内线性关系良好（r＝0.999 6），平均回收率为100.5%，RSD为1.65％。 　　3 原子吸收分光光度法（AAS） 　　AAS通常借比较对照品溶液和供试品溶液的吸光度，求得供试品中待测元素的含量。迟文俊等[4]采用间接AAS测定片剂中盐酸小檗碱的含量，运用离子对分析技术、萃取技术和光谱技术相结合的方法，收集有机相在原子吸收分光光度计上，用Co空心阴极灯在240.7 nm处测得的各有机相的吸收度，选择最佳测定条件。样品经萃取，测定吸收度，用回归方程A＝0.035 9C＋0.006 0，求出Co的含量，按小檗碱离子∶硫氢酸钴离子为2∶1的关系，换算得出小檗碱的含量。本方重复性好，准确度高，平均回收率为99.8％，RSD为1.21％。研究结果表明，在该法中利用Co标准曲线，能够有效控制片剂中小檗碱的含量，灵敏度高，操作简单，使AAS的应用领域由原来的单纯测定无机金属元素，拓宽为可间接测定生物碱类有机药物的含量。 　　4 薄层扫描法（TLC） 　　TLC是使用薄层扫描仪对薄层色谱的斑点进行扫描的一种分光光度法，具有检测光谱范围宽，扫描速度快，数据处理和操作简便，结果重现性好等特点。杨辉[5]采用TLC法建立复方黄连颗粒中盐酸小檗碱含量测定方法，采用高效硅胶G薄层板，以正丁醇－冰乙酸－水（5∶1∶1）为展开剂，检测波长为345 nm。结果盐酸小檗碱在0.091 2～0.273 6 μg范围内呈良好的线性关系，相关系数r＝0.998 6，平均回收率为100.80％，RSD＝3.53％（n＝5），可作为复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量控制方法。莫可丰等[6]建立TLC法测定肤阴洁中盐酸小檗碱含量的方法，采用双波长反射法线性薄层扫描法对处方中主要成分盐酸小檗碱进行含量测定，采用硅胶GCMC-Na薄层板，以正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2）为展开剂，检测波长为λS＝430 nm，λR＝600 nm，结果平均回收率为100.8％，RSD为2.3％。康四和等[7]研究建立荧光薄层扫描法测定卫胃颗粒中盐酸小檗碱的含量，样品经提取、薄层展开后，采用荧光扫描法对卫胃颗粒中盐酸小檗碱进行含量测定，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂，激发波长λ＝366 nm。结果盐酸小檗碱在0.031 04～0.155 20 μg范围内呈良好的线性关系，回收率为100.8％，RSD＝1.9％。 　　5 毛细管电泳法（HPCE） 　　HPCE法是近年来发展较快的一种新型、高效、快速的分离分析技术，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。目前，HPCE法已被广泛应用于药物分析中，具有分辨率和灵敏度高、快速、分析耗费低、样品预处理简单等特点。凌宁生等[8]利用毛细管区带电泳对金芪降糖片进行分离分析，采用HPCE法快速地对金芪降糖片中3种生物碱进行分析并测定其中盐酸小檗碱的含量。采用未涂层石英毛细管（50 cm×100 μm），以40 mmol/L磷酸氢二钠－甲醇（65∶35）为缓冲液，254 nm为测定波长，进样压力0.5 Psi，5 s，分离电压14 kV，柱温25℃。结果在12 min内测定盐酸小檗碱，盐酸小檗碱平均含量为1.52％（g/g），在0.01～0.20 mg/ml范围内线性关系良好（r＝0.999 9），平均回收率为100.9％，RSD＝1.92％。张琦等[9]研究采用HPCE法的毛细管区带电泳分离模式分离测定清经胶囊中小檗碱含量，采用熔融石英毛细管柱（50 cm×75 μm），运行缓冲液为0.2 mol/L乙酸钠溶液－甲醇（8∶2），265 nm为测定波长，进样压力20 kPa?s，运行电压15 kV，毛细管柱温25℃。结果盐酸小檗碱进样浓度在9.95～159.20 mg/L范围内线性关系良好（r＝0.999 9），平均加样回收率为100.4％，RSD＝1.9％(n=5)。 　　6 高效液相色谱法（HPLC） 　　HPLC法具有分离效率高，分析速度快，重现性好，专属性强等优点，广泛应用于药物分析中，特别适合复方制剂中的多种成分的分离。HPLC法测定盐酸小檗碱含量研究的文献较多，许波等[10]建立了HPLC法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱的含量，采用ODS柱，以0.1％十二烷基硫酸钠的甲醇-0.2 mol/L酒石酸（80∶20）为流动相，流速为1.2 ml/min，醋酸氢化可的松为内标物，用紫外检测器于240 nm波长处检测，结果盐酸小檗碱的线性范围为0.01～0.09 mg/ml，平均回收率为99.2％，RSD为0.93％，且重现性和准确性良好，分析速度快，完成一次分析只需15 min，大大节省了分析时间。张秀桥等[11]建立三黄泻心汤中盐酸小檗碱含量的HPLC测定方法，卢日刚等[12]研究建立HPLC法测定妇康洗液中盐酸小檗碱含量的方法，对复方制剂中含有的小檗碱进行含量测定研究，结果较为满意。黄连中结构相似的小檗碱型生物碱主要有小檗碱、黄连碱、巴马亭和药根碱等，近年来亦多采用HPLC法测定其含量。刘传玲等[13]建立HPLC法测定黄柏中盐酸小檗碱含量的方法，王振军等[14]研究建立 HPLC法测定克痔栓中盐酸小檗碱含量的方法，利用HPLC法较高的分离特点，分离出制剂中的盐酸小檗碱，较好地控制了制剂的质量。
　　盐酸小檗碱作为抗菌药，常制成复方制剂和各种剂型广泛应用于临床，对其含量测定方法以HPLC法应用研究较为普遍，因HPLC法具有较高的分离效率和较快的分析速度，最适宜复方制剂，特别适用于成分复杂的多组分制剂，而UV法测定盐酸小檗碱的含量近年来已较少使用。随着盐酸小檗碱新的复方制剂和新剂型的问世，将会产生更多、更新、更完善的含量测定方法，使盐酸小檗碱制剂质量得到有效的控制。 　　 　　[参考文献] 　　[1]贺子华.盐酸小檗碱片质量分析方法比较[J].安徽医药,):461. 　　[2]崔颖,张静泽,张喜云,等.导数光谱法测定芪黄颗粒中小檗碱的含量[J].武警医学院学报,):25. 　　[3]徐英瑜,毛书征.二阶导数光谱法同时测定葛根芩连微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷含量[J].中国医院药学杂志,):731. 　　[4]迟文俊,白景录,顾春玲,等.间接原子吸收分光光度法测定片剂中盐酸小檗碱的含量[J].卫生职业教育,):147. 　　[5]杨辉.TLCS法测定复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药,):25. 　　[6]莫可丰,尹梅芳.薄层扫描法测定肤阴洁中盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,):667. 　　[7]康四和,王春红,陈昌彪.荧光薄层扫描法测定卫胃颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].中国药师,):547. 　　[8]凌宁生,李玉红,李林,等.毛细管电泳法测定金芪降糖片中小檗碱的含量[J].中国药科大学学报,):51-53. 　　[9]张琦,赵因,张新申.高效毛细管电泳法测定清经胶囊中小檗碱含量[J].药物分析杂志,):133. 　　[10]许波,高良美.高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄啶的含量[J].药物分析杂志,):21. 　　[11]张秀桥,周东斌,刘炎文,等.三黄泻心汤传统汤剂与中药配方颗粒汤剂中盐酸小檗碱含量测定比较[J].中国医院药学杂志,):408. 　　[12]卢日刚,唐敏玲,韦向红,等.RP-HPLC法测定妇康洗液中盐酸小檗碱的含量[J].药物分析杂志,):195. 　　[13]刘传玲,董丽萍,丛永壮.HPLC法测定黄柏中小檗碱的含量[J].中国药事,):383. 　　[14]王振军,祝红达,杨远荣,等.高效液相色谱法测定克痔栓中盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,):678. 　　（收稿日期：）
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黄连复方制剂中小檗碱和其它活性成分的多指标HPLC分析
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3秒自动关闭窗口原小檗碱类生物碱作用差异的机理研究--《天津医科大学》2004年硕士论文
原小檗碱类生物碱作用差异的机理研究
【摘要】：原小檗碱类生物碱是一种异喹啉类生物碱，广泛存在于多种属植物体内，其药理作用广泛，其中抗菌、镇痛和降糖作用是临床常用的药理作用。我们通过实验观察原小檗碱型生物碱小檗碱、黄连碱、巴马汀、药根碱、延胡索乙素及罗通定的抑菌作用、镇痛作用和抗糖尿病作用的差异，并分别从理论上初步分析了其作用机理。
1．抑菌作用
采用平皿扩散法，研究了原小檗碱类生物碱对G~+菌(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌)、G~-菌(痢疾杆菌、肺炎克雷伯杆菌)标准菌株的抑菌作用。对于G~+菌金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，小檗碱的抑菌作用是巴马汀的3倍，是药根碱的10倍左右；对于痢疾杆菌的抑菌作用，小檗碱是黄连碱1.4倍，是巴马汀的10倍；对肺炎克雷伯菌仅小檗碱和黄连碱有抑菌作用，且小檗碱的抑菌作用是黄连碱的1.9倍。
分析结构表明，原小檗碱的季铵结构是抗菌活性所必须的结构，C2C3位的亚甲二氧基能增强抗菌活性。原小檗碱立体结构与四环素类和喹诺酮类结构叠合较好，提示作用机理有相似之处，可能通过抑制细菌核蛋白体30S亚基或DNA回旋酶A产生抑菌作用。配体-受体对接研究结果表明，原小檗碱与DNA回旋酶B和sortase B不匹配。
2．镇痛作用
给药1小时后，小鼠腹腔注射0.6％醋酸引起炎性疼痛，立即记录15分钟小鼠扭体次数，并计算药物对扭体反应的抑制率。罗痛定、延胡索乙素、小檗碱、巴马汀及黄连碱对扭体反应的抑制率分别为98.4，92.7，40.8，26.7，11.0％。罗通定、延胡索乙素和小檗碱的作用有统计学差异。分别测定给药前和单次灌
天津医科大学硕士研究生学位论灰
胃给药后30，60，120分钟的热板致痛阂值。罗通定和延胡索乙素在50mg/kg能
明显延长小鼠舔足时间，但小果碱、巴马汀和黄连碱150mg/kg对小鼠舔足时
间仍没影响。
理论计算表明，原小聚碱四氢化后(延胡索乙素，罗通定)，B一C环的二面
角以及N一CS，N一C14的键长发生改变，由此引起立体结构发生明显改变，镇痛
作用显著提高。四氢原小璧碱的镇痛作用与其它化合物不同，可能主要通过中
枢起作用。而小聚碱等原小栗碱季胺盐与环氧酶对接有合理性，提示可能是通
过抑制环氧酶而产生镇痛作用。分子动力学模拟显示，原小聚碱化合物与环氧
酶2主要是通过范德华作用结合，而且2，3位及9，10位的取代基在与受体结合
时贡献不同，这可能与其对化学性疼痛的抑制率不同相关。
3.降糖作用
尾静脉快速注射四氧喀咙SOm叭g制造糖尿病小鼠模型，连续5天灌胃
给药，末次给药2小时后测空腹血糖。小璧碱、黄连碱Zoomg/kg对四氧嚓咙
小鼠有降糖作用，且二者的降糖作用与二甲双肌比较差别无显著性印0 .05)，巴
马汀则无降糖作用。
原小聚碱化合物CZ，C3位的亚甲二氧基可能与其降糖作用有关。原小聚
碱化合物与胰岛素增敏剂受体PPAR一丫对接结果与实验结果有一定的可比性，
认为原小聚碱可能通过PPAR一Y受体发挥降糖作用。进一步的分子动力学模拟
显示，原小栗碱主要是通过范德华相互作用与PPAR一Y蛋白产生作用。
总之，原小璧碱类生物碱结构差异很小，而作用面很广，作用差异较大，
对构效关系的研究是一个很大的挑战。我们结合理论和实验研究，找到了一些
可能的作用规律，但要真正阐明作用规律，还需要大量更深入的理论和实验研
【关键词】：
【学位授予单位】：天津医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2004【分类号】：R96【目录】：
中文摘要3-5
英文摘要5-8
第一部分 实验研究10-30
第一章 抑菌作用10-21
第二章 镇痛作用21-25
第三章 降糖作用25-30
第二部分 作用机理的理论研究30-61
第四章 理论研究方法简介30-34
第五章 原小檗碱类化合物的三维结构和作用差异比较34-39
第六章 抗菌作用的机理研究39-47
第七章 镇痛作用的机理研究47-55
第八章 降糖作用的机理研究55-61
参考文献65-72
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