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我是学眼科的，最近要用高效液相色谱法测定睑板腺分泌物的脂质，可是对于高效液相一窍不通，有几个问题请高手指点：1.我取到的样品量很少，只有几个微升，老师说做高效液相至少100微升，怎么办？2.无论是什么样的高效液相色谱仪，同样的物质都是买一样的对照品吗？
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1 你老板说的100ul 没有提到浓度，你也没说明浓度，再者进样环有很多种型号的，也有小剂量的，同时，你是否可以将你的样品稀释，只要在定量范围内就可以了。2 对照品是根据你物质来定的，只要达到你测量的目的就行。
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样品浓度在线性范围内即可，对照品是根据你要测的项目定的，跟高效液相色谱仪型号无关。摸条件的过程比较麻烦，耐心点，注意别浪费本来就不多的样品。
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1. 如果你的几个微升样品浓度较高，可以稀释后再进样；2. 对照取决于你的所测样品、样品基液等条件，与HPLC型号关系不大
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高效液相色谱是做含量测定现在用的比较多的方法之一，选择标准品一是为了做标准曲线（concentration-Area），通常采用外标法进行含量计算；二是在每次做样品分析前，要进一到两针的标准品，看看待测组分的保留时间是多少。
对于待测样品仅有几微升，要看浓度大小。前面提到先做标准曲线，如果你得到的样品量少，做标准曲线时最小浓度尽量低些，同时将待测样品用适当的溶剂进行稀释后进样。
希望有帮助。
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进样的话不一定要100ul的吧 几十ul也可以的 可能你们老师要那么大的进样量是想减少进样体积上的误差吧
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飘然雨下 样品浓度在线性范围内即可，对照品是根据你要测的项目定的，跟高效液相色谱仪型号无关。摸条件的过程比较麻烦，耐心点，注意别浪费本来就不多的样品。那我本来就要测样品浓度，我怎么知道他在不在线性范围内呢？
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关于丁香园&编者按：诺丽（Morinda citrifolia Linn.）为巴戟天属茜草科植物，其果实诺丽果可用来治疗多种疾病，如糖尿病、高血压、心脏不适、疼痛、精神压抑及消化不良等[1]，其叶则对牙龈炎、牙周炎、喉炎、风湿性关节炎、皮肤病、扭伤等具有一定的疗效[2]。南太平洋岛国人用诺丽果保健养生已有二千多年的历史，并将之誉为“植物之后，上帝的恩赐”[3]。不同国家对诺丽果的叫法不同，在大溪地称为Noni为最通俗的名称，在印度称为Och，马来西亚称为Mengkudo，中国称为巴天戟，大多东南亚国家称为Nhan，加勒比海称为止疼树，澳洲称为奶酪果。诺丽中主要的微营养成分是酚类物质、有机酸和生物碱，其中，酚类物质中最重要的是蒽醌[4-5]。其中莨菪亭（又名东莨菪素、东莨菪内酯等）是酚类中最重要的组分之一，亦是诺丽果的功效性成分，其具有较强的生物活性。莨菪亭英文名称：，化学命名：羟基甲氧基香豆素羟基甲氧基苯并吡喃酮东莨菪内酯（），分子式：，相对分子质量：世界各国在发展保健品的过程中，大体都经历了3 个阶段：第一代为初级保健食品，仅根据食物中的营养成或强化的营养素来推知该类食品的功能，未经严格的实验证或严格的科学论证；第二代保健食品经过动物或人体实验，证明其具有某种生理调节功能；第三代保健食品，不仅其特定生理调节功能需经动物或人体实验，证明其明确可靠，而且还需确知有该项功能的功效成分的化学结构及其含量，具有功效成分明确、含量可测、机理清楚、研究资料充实、临床效果肯定等特点。目前，我国的保健品已发展至第3阶段。由于诺丽果浆属于新食品原料，具有食用安全性[6]，且其功效性成分明确，因此，海南大学教育部热带多糖资源利用工程研究中心及热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室的陈晨等科研人员以其为原料制成第3代保健食品。该实验中先按25：1的比例添加赋形剂麦芽糊精将诺丽果浆冻干，再混以其他中药材及辅料制成原料自制诺丽复方保健品（颗粒冲剂剂型）。研究目的：莨菪亭在中国药典2010版一部中“丁公藤”的含量测定下的参考流动相为：甲醇-水-冰醋酸（32:68:0.16，V/V）[7]，经实验证明，该流动相体系无法有效分离测定诺丽果浆及保健品中的莨菪亭。为定性定量检测诺丽果浆中的莨菪亭，以及判定粉末状保健品中莨菪亭的检测是否受其他原辅料的干扰，故需探索新的检测方法。该实验研究了诺丽果浆及其中药复方保健品中莨菪亭的高效液相检测方法。研究结果：具体如下：优化色谱条件：依利特SinoChromODS-BP色谱柱（4.6 mm?200 mm，5 um），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速1 mL/min，柱温25 ℃，进样量20 uL，检测波长348 nm。结果表明，莨菪亭在0.5～20 ug/mL质量浓度范围内与其色谱峰峰面积线性关系良好，回归方程为Y=73.86X－0.554（R2=0.999），平均回收率104.05%和97.11%，相对标准偏差为0.81%和1.99%。该方法准确可靠，可用于定性定量测定诺丽果浆及其保健品中的莨菪亭。&引文格式：陈晨, 刘平怀, 罗宁, 等. 高效液相色谱法检测诺丽果浆及其中药复方保健品中莨菪亭[J]. 食品科学, ): 83-87.& DOI:10.7506/spkx1604015. http://www.CHEN Chen, LIU Pinghuai, LUO Ning, et al. Determinationof scopoletin in noni juice and its traditional Chinese medicine compoundhealth care products by HPLC[J]. Food Science, ): 83-87. (in Chinesewith English abstract) DOI:10.7506/spkx1604015.http://www.&参考文献：[1] NEILS M D. Noni: nature’s amazing healer[M]. Pleasan Grove:Woodland Publishing, . [2] 张伟敏, 魏静, 施瑞诚, 等. Noni果的活性成分和生理功能的研究进展[J]. 天然产物研究与开发, ): 72-74. DOI: 10.3969/j.issn.07.06.041.[3] WEST B J, JENSEN C, NOWICKID, et al. Morinda citrifolia (Noni):a literature review and recent advances in Noni research[J]. Acta Pharmacologica Sinica, ): . DOI: 10.0-002. [4] WANG M Y, SU C. Cancer preventive effectof Morinda citrifolia (Noni)[J].Annals of the New York Academy of Sciences, : 161-168. &DOI: 10.1111/j.01.tb02737.x.[5] 何其伟, 吴培云, 梁益敏, 等. 诺丽果肉化学成分研究[J]. 中成药, ): . DOI: 10.3969/j.issn.12.09.025.[6] 林卫华, 郑定仙, 冯丁山, 等. 诺丽果粉食用安全性研究[J]. 中国热带医学, ): . DOI:10.ki.46-1064/r..[7] 中国药典委员会.药典: 一部[M]. 北京: 化学工业出版社, 2005: 3; 附录115. &该论文发表于2016年《食品科学》第4期，副主编：张秀敏。&&&&食品科学杂志(cfoodsci)　
　文章为作者独立观点，不代表微头条立场
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