沙门菌的分离鉴定及血清学分型_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
沙门菌的分离鉴定及血清学分型
上传于|0|0|文档简介
&&沙门菌的分离鉴定及血清学分型
阅读已结束，如果下载本文需要使用2下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩52页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢细菌血清学实验
第7章& 细菌血清学实验
血清学实验是利用抗原和抗体可在体外发生特异性反应而设计的实验。细菌是良好的抗原，可用细菌免疫动物制成抗体(即诊断血清或免疫血清)，检测或鉴定未知细菌；也可以用细菌制成抗原（即诊断菌液或免疫原）来检测未知抗体或制备诊断血清。用已知抗体鉴定标本中未知细菌或细菌抗原常称为血清学鉴定，反之，用已知抗原检测标本中未知的抗体称为血清学诊断。根据抗原的不同，可采用不同的实验方法。本实验要求熟悉常用细菌血清学实验原理，掌握其实验方法及结果判断。
第1节& 凝集实验
细菌等颗粒性抗原，当与相应的抗体混合后，在一定浓度的电解质条件下，可出现肉眼可见的凝集现象，称为凝集实验。
一、玻片凝集实验、试管凝集实验及塑料板凝集实验见肠杆菌科相关实验。
二、SPA协同凝集实验
葡萄球菌A蛋白（SPA）具有能与人及多种哺乳动物血清中IgG 类抗体的Fc段高亲和力结合的特性。IgG Fc段与葡萄球菌A蛋白（SPA）结合后，抗体就吸附于葡萄球菌的表面，使金黄色葡萄球菌被IgG致敏。而与葡萄球菌A蛋白（SPA）结合的抗体，其两个Fab段仍能与相应抗原发生特异性结合，当其与相应的细菌、病毒或毒素抗原接触时，可出现特异性凝集反应。这种以葡萄球菌作为IgG抗体载体进行的凝集反应称为协同凝集实验。该方法简便快速，敏感性强，结果易于观察，已广泛应用于临床检验中。常用于对链球菌、脑膜炎奈瑟菌、沙门菌、志贺菌的快速鉴定及分群、分型等。临床上常用于感染性疾病的快速诊断。亦用于测定细菌的可溶性产物，如细菌外毒素的测定。本实验是将已知伤寒沙门菌免疫血清与SPA结合后，在电解质存在条件下，能与相应的细菌发生协同凝集反应，出现肉眼可见的凝集块，以检测未知细菌。
1. 待检菌株
1．标准菌株：伤寒沙门菌纯培养物
2．诊断血清：伤寒沙门菌免疫血清
3．正常兔血清
4．冻干葡萄球菌A蛋白（SPA）（生物制品公司有售）
5．0.01 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲盐水（PBS）
6．其他：0.9%氯化钠(NaCl)、蒸馏水、黑色反应板等
1．SPA悬液制备：取冻干葡萄球菌A蛋白（SPA）1份，加蒸馏水1 mL，待完全溶解后置离心管中，以少量磷酸盐缓冲液（PBS）离心洗涤1次，3000 rpm离心30分钟，弃去上清，沉淀物中加PBS 1 mL，制成10%菌体悬液。
2．抗体致敏SPA菌体悬液制备：取10% SPA菌体悬液1 mL加入高效价特异性伤寒沙门菌免疫血清0.1～0.2 mL，置37℃水浴中致敏30分钟，中间摇动几次，取出后用PBS洗3次，每次3000 rpm，离心30分钟，弃上清，最后混悬于含有0.1%叠氮钠的同一磷酸缓冲液（PBS）1 mL中即成。
3．正常兔血清致敏SPA菌体悬液制备：致敏方法同上。
4．取黑色玻璃板或洁净玻片一张，划分三等份，并标记1，2，3区（如表7-1）。
5．在1，3区各加抗体致敏的葡萄球菌A蛋白（SPA）菌体悬液1滴，在2区加正常兔血清致敏的葡萄球菌A蛋白（SPA）菌体悬液1滴。然后于1，2区内加待检菌株少许，在3区内加标准菌株少许。
6．摇动玻片使混匀，于2分钟内观察结果。
抗体致敏SPA
正常兔血清致敏SPA
抗体致敏SPA
（实验组）
（阴性对照）
（阳性对照）
表7-1&&& SPA协同凝集实验
1．凝集程度确定：根据凝集颗粒出现的速度、凝集颗粒的大小及液体的混浊程度，以“+”记录实验结果，判断标准如下：
立即凝成粗大颗粒，液体透明，则记为“++++”：
在2分钟内凝成较大颗粒，液体透明，记为“+++”：
在2分钟内凝成小颗粒，液体稍混浊，记为“++”：
凝成细小颗粒，液体较混浊，记为“+”：
2分钟内无凝集颗粒，液体混浊，记为“－”：
2．结果判定：根据凝集与否对待检菌株做出判定。
第2节& 沉淀实验（毛细管法）
沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反应。用于鉴定细菌的沉淀实验，主要指环状沉淀实验，即用已知的抗血清与细菌的可溶性抗原（细菌的提取物、含有细菌抗原的患者血清及脑脊液、组织浸出液等）相接触，在电解质存在条件下，于两液交界面形成肉眼可见的白色沉淀环。
本实验一般不稀释抗体，而是将抗原作高倍稀释，故主要用于鉴定微量抗原，如法医学中鉴定血迹，流行病学用于检查媒介昆虫体内的微量抗原等，亦用于鉴定细菌多糖抗原。
1．菌种：待检细菌抗原液——用酶或盐酸提取的炭疽杆菌特异性抗原液
2．诊断血清：抗炭疽杆菌免疫血清
3．其他：正常兔血清、毛细管等
1．取毛细管（75×1.04～1.24 mm）2支于架上，标明1，2号。
2．用毛细吸管吸取免疫血清加于1号管约1/3高度，加正常血清于2号管1/3高度。
3．用毛细吸管沿管壁缓慢向1、2号管血清上层加入等体积的待检抗原液，使成一明显界面（切勿使两者混合，也不能有气泡）。
4．置室温15～30分钟观察结果。
1．反应等级：观察抗原抗体液面交界处，根据白色沉淀出现的情况按以下原则判定结果：
++++：白色沉淀充盈毛细管。
+++：白色沉淀充盈大部分毛细管。
++： 出现肉眼易见的白色沉淀环。
+：于放大镜下可见细小白色团块。
－：未见白色沉淀环。
2．结果判定
&& 阳性：1号管“2＋”以上，2号管无白色沉淀。
&& 阴性：1、2号管均无白色沉淀。
第3节& 荚膜肿胀实验
细菌荚膜与相应特异性抗体结合，形成抗原抗体复合物后，可使细菌的荚膜显著增大，表现为在细菌的周围有一宽阔的环状带，称此为荚膜肿胀实验。本实验可用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽杆菌的检测和荚膜分型。
1．菌种：肺炎链球菌
2．诊断血清：抗肺炎链球菌免疫血清
3．正常兔血清
4．试剂：1%美蓝水溶液
1．取洁净玻片1张，用记号笔在两侧划两个直径为1cm左右的圆圈。
2．在玻片两侧圆圈内各加待测标本1～2接种环。
3．在玻片左侧圆圈内加抗血清、右侧圆圈内加正常血清，各为1～2接种环，混匀。
4．于玻片两侧圆圈内各加一接种环1%美蓝水溶液，混匀后，加盖玻片，放湿盒室温下5～10分钟后镜检。
阳性：在蓝色菌体周围可见界限清晰、较宽阔的无色环状带即肿胀的荚膜，而在对照一侧看不到此现象。
&&& 阴性：实验和对照两侧均看不到肿胀的荚膜。青岛海博生物为您提供种类齐全的微生物培养基产品及相关技术服务！
海博商城全新改版，更丰富的产品内容，更美观清新界面，微生物培养基网上订购平台欢迎您的访问。
600多种微生物培养基配方、原理、用法、质量控制，涵盖所有常检细菌及其他细菌。
> ->->血清学实验原理
血清学实验原理
录入时间: 10:28:45
来源：青岛海博生物
血清学反应
血清学反应是指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，可出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。在微生物检验中，常用血清学反应来鉴定分离到的细菌，以最终确认检测结果。&
是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合的物质。产生的相应抗体与抗原结合，形成抗原―抗体复合物，产生免疫反应，从而保护机体不受抗原侵害而造成破坏。一般抗原都是外来物体，如细菌、病毒、寄生虫等&。
机体受外来抗原物质刺激后，产生的一种与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(Ig)&被分为G，A，M,&E,&D等几类.&最典型的抗体是IgG,&有Y型三维结构,&包含两套重链和轻链。
颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination&reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。直接凝集反应
颗粒性抗原如细菌和细胞与相应抗体直接结合所出现的反应。
版权所有 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司}