昆虫细胞sf9培养基问题(培养基,昆虫,转染,去离子水) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 昆虫细胞sf9培养基问题(培养基,昆虫,转染,去离子水)
摘要: [昆虫细胞sf9培养基问题(培养基,昆虫,转染,去离子水)] 我在做培养昆虫细胞sf9进行转染实验时,一直不是很顺利,实验室没有购买Gibco的sf-900 II SFM用于转染,因为实验室有位高手建议用Grace`s Insect Cell Culture Medium,power用三蒸去离子水配置过滤除菌也可以用做转染溶液,但我作出来的结果,即使没有加Cellfectin转染试剂,在换培养基中六孔板3h后 就出现皱缩,无光泽等不良细胞状况,请问各位高手: 关键词:[培养基 昆虫 转染 去离子水 过滤除菌 六孔板 皱缩]……
我在做培养昆虫细胞sf9进行转染实验时,一直不是很顺利,实验室没有购买Gibco的sf-900 II SFM用于转染,因为实验室有位高手建议用Grace`s Insect Cell Culture Medium,power用三蒸去离子水配置过滤除菌也可以用做转染溶液,但我作出来的结果,即使没有加Cellfectin转染,在换培养基中六孔板3h后.就出现皱缩,无光泽等不良细胞状况,请问各位高手:在培养昆虫细胞的众多培养基中,如Gibco公司的各有什么作用?是不是必须用invitrogen公司产品说明中建议使用的sf-900 II SFM培养基用做转染溶液?请给予指点,不胜感激!先谢谢各位了!!!我用的载体是pFastBac1.
回复我们实验室天天做转染，没有买Gibco的培养基以前就是配Grace"s培养基不加抗生素(antibiotic)和，用做转染现在连蛋白都不加了一般都是做转染之前，用自配培养基洗细胞两次然后用自配培养基配置转染混合液，放置4到6小时，一般4到5小时，肯定不超过6小时换新鲜的有的Grace"s培养基经过转染的细胞肯定都有点变形但经过12小时就正常了回复请教zsummay：你们实验室做转染用的自配培养基的配方，需要调pH吗？谢谢你！我做转染之间就用的Grace粉，用三蒸水溶解，过滤除菌用做转染。经过24h细胞还是那样，好象是死了，不知道问题出在哪里？请指教，谢谢！回复帮帮忙，是否有高手做过？回复应该要调pH值的。回复昆虫细胞的培养环境是在6.0-6.4之间，直接配的培养基差不多是这个范围，我觉得做转染是不是还要加一些别的东西，请实验室自配培养基的给予指教，谢谢！回复可以直接用grace的粉剂抽滤的不过你有没有加NaHCO3？PH要调整到6.0,抽滤过程大约会上升0.2左右这样配出来的培液就是grace‘s insect medium，unsupplemented，适合转染回复谢谢mutton建议，我是没有加NaHCO3，现在看结果，直接用invitrogen的Grace`s insect medium，supplemented液体培养基，不加血清，也可以用来转染，已观察到细胞形态的变化，但不知道是否对表达有影响，请各位指教！
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图文并貌~一楼给度娘~
这是刚买回来那天拍的。放在茶几上，还有些虚弱。2012年的4月7日，路过热闹繁华的商业中心，一位老奶奶被城管严厉呵斥，声音大的我驻足张望，于是发现这位老奶奶是推着车在卖小鸭子，车上有一个大簸箕，里面一对小鸭子用稚嫩的眼神害怕的张望着周围的人群~瞬间，这群小鸭子的眼神触动了自己心底的那根弦，也让自己想起了曾经有小鸭子陪伴的美好童年~于是买了两只，转身走的时候男朋友说2只够吗，喜欢的话再买2只吧，一起好玩~于是，我们家的新成员，四只小鸭子，他们也有了自己的名字——豆豆。
楼上的这张照片，我发给朋友看的时候，都以为是个玩具，嘿~
还是10岁那年的时候，父亲给自己买了两只鸭子，从此为自己的人生添上了一段有小鸭子陪伴的完美记忆。那是我儿时的第一对宠物，他们的名字叫豆豆，黑一点的叫红豆，白一点的叫菊豆。当然了，那年是没有手机数码相机的，所以，他们只能永远的存在我的脑海里，他们的延续也在现在的这群小鸭子身上。小小的它们被握在手上显得是那么虚弱幼小，当它的眼神看向你时，总会激起心底最柔软的保护欲。
儿时的那对鸭子，刚刚买回家时别提有多欢喜，连睡觉都要把他们的小盒子放在枕头边，为此，母亲没有少给我洗床单，真心感谢那时候愿意接受我养小鸭子的父母。小鸭子一天天长大，而自己也在成长，也在学着去明白什么叫——责任，对豆豆们的责任。站在茶几上的他们好奇的打量着周围，窗外有光，他们对其充满了好奇与向往。
刚刚回到家的他们，那时他们总是喜欢害怕的缩着脖子，围在一起警惕的打量周围，也不愿意与你玩耍，连你伸过去手拨弄他们都提不起他们的兴趣。不知道什么原因，刚开始的他们总是显得特别的没有精神。卖小的老奶奶是个外地人，口音浓烈的我听不太明白她交代的该如何喂鸭子。于是回到家还是按照自己以前养小鸭子的经验，给他们吃熟米饭，买切碎了一点点喂他，少喝水。放回盒子里的时候给他们放一个灌满热水的矿泉水瓶，好让他们取暖。因为小鸭子对温度实在太敏感了。
好像木有神马人看，好吧我先歇歇~去给小鸭子喂点吃的去~
好吧木有人看我也写完~纪念~头一次发现帖吧还有这个小鸭子吧，惊喜。
每一天它们都在成长，这个时候已经是买回家一周了。楼下有个阿姨买了2只7只小鸡，我把豆豆们带到楼下散步的时候，阿姨也把自家的鸭子和小鸡拿出来晒太阳，发现我家小鸭子整整大了她家小鸭子半个头。她家的小鸭子有一只当天一直缩着脖子特别萎靡，我跟阿姨说这个小鸭子肯定活不到明天，果然，第2天它就去了鸭星.不是我嘴贱,是阿姨问我怎么养的我告诉她后她不认可,于是我就这么说了一句,说如果不好好照顾它们,这一只是肯定会挂的,剩下那只肯定也会因为孤独而shi.因为当时那只小鸭子看起来实在太萎靡了.
后来没几天,楼下阿姨的另一只也去了鸭星，小鸡也死了3只,据说是阿姨家小孩子喜欢拿手上玩了掉到地上，然后掉到了厕所洞里捞起来的时候已经……所以我每次带小鸭子出去散步都特别怕小孩子会上来抓它们捏它们。小鸭子小鸡都是不能被人整在手上捏啊玩的，会shi的快。小们慢慢长大的同时，精神也一天比一天好，开始喜欢与你嬉闹了，尤其爱啃人的手。这个时候已经开始给它们吃面包虫了~补充蛋白质~要长的快噢~
我可不可以弱弱的求一个加精
加油！把小鸭们抚养长大
为虾米不对~？
哈哈，好可爱呀，跟毛绒玩具一样~~~~~小学的时候家里也养过好多鸭子，最后都不幸走了，但是养活了2只，养了好大好大~~~~那时候取名都好傻，一个叫小黑一个叫小黄~~~
恩恩，我也是第一次来小鸭子，在兔子吧无意看到的~~
哈 我的小鸭子是黑的
现在手机电量不足没法拍照了
下周我也上图图~
童年也有一只小鸭子陪了我一阵子 这一只我发誓一定要养好它!不过都两周过去了感觉它没长大呢
不过嘴倒是长了
难不成是吃胡萝卜的缘故
养这么多你照顾得来吗
我想问问。我刚买的小鸭子。。我手贱给他洗澡。导致拉稀。怎么办啊？应该吃什么药比较好啊。。还有小鸭子老缩着脖子正常么？
那个请问你鸭子长大了咋办，拉好多屎啊
后面怎么了，期待
鸭子要预防鸭球虫病
我是来给帖子收尾扎口的。。没想到过去了2年多了还会有人回我的帖子。。
@就复读4后来因为我要去武汉培训，鸭子便交给了家里养。其中一只小鸭子在我送到家里养之前就得了软脚病死掉了。死掉的这只最可爱，呆呆的，他叫，因为腿软站不起来，慢慢的就没精神没食欲，那时候也不知道该怎么办。于是眼睁睁的看阿呆挣扎了一天，最后在男朋友的手中抽搐 死去。。哭着在楼下的树前埋了他。。眼泪哗哗的对着阿呆的小坟头说希望来世你不要是只鸭。。剩下三只带回家~结果没多久我妈妈给我电话说其中一只鸭子也开始腿软站不起来（缺钙其实），然后我妈妈把溶水里让它喝，然后溶水里用吸管吸了含住吸管吹进小鸭子嘴里吞下，最终这个小鸭子活了。。2012年9月份培训结束回到家里，三个鸭子都长大了。后来那个脚软站不起来被救活的小鸭子叫猥琐~因为它长的猥琐。。其实这个时候已经到了鸭子要踩水的季节了。。踩水是方言，就是公鸭子踩母鸭子背上交配。然后猥琐由于小时候腿有问题就一直是三只鸭子里长的最小个的那个。。其他俩鸭子都比他强壮，于是猥琐成了被经常踩的那个。没多久，猥琐就被踩的站不起来了，也就是一个晚上的事儿，第二天妈妈就发现猥琐很虚弱无法站起来。妈妈很心痛，不忍心去杀了猥琐吃掉（这个时候的猥琐是健康的能杀了吃的），于是就送给了附近山下一户人家说鸭子是好的麻烦尽快杀了吃（也是 为了让猥琐死个彻底不要太痛苦的苟延残喘）。本以为猥琐就会这么死去，没想后来有次妈妈散步遇到了这户人家，就问人家鸭子吃了吗，那户人家说：“哦鸭子太瘦了觉得吃不着，就给小孩子玩儿去了，结果小孩子玩死了”。我妈听后心痛加后悔啊。。。猥琐得受了多大的痛苦才死去。。最后的两只，由于天天互相踩也越来越虚弱，妈妈无奈之下狠心让爸爸拿去菜市场杀掉吃掉了。。
这就是家禽当宠物的悲剧 。。鸭子是我最喜欢的动物，这辈子我可能再也不会在无法保障给小鸭子一个完整的人生的时候在养鸭子。也希望各位喜欢小鸭子的朋友能善待每一只。。就算是吃掉也好过痛苦的玩死它们。。也希望宜昌不要再有卖小鸭子的了，因为每次到了卖小鸭子的时候，小区里的垃圾桶小鸭子的尸体都是触目惊心。。
如今养了一只捡回来的流浪猫。希望所有逝去的鸭子都安好。
感谢各位还能关注我的帖子。。祝安好。
楼主想法是对的，城市里不适合养鸭，小孩子更不尊重生命，把小鸭当玩具虐待。丧尽天良。祝那些卖小鸭当玩具的畜生和虐待他们的全家不得好死。来世变蛆虫。
楼主是好人，希望以后见着卖小鸡小鸭的能够挺身而出进行阻止。好人一生平安
哎 昨晚我的鸭也因为软腿病死掉了事情是发生在前晚的 我看它时发现它浑身湿透 不知道它怎么栽到放水的盘里面了 然后我就很急的拿吹风机帮它吹了 吹的过程一直在挣扎 然后一不小心就掉下凳子了 然后我就放了回去然后隔了一小时发现它又湿了 而且变得很怪 一直在倒退 不肯吃东西 站不住脚 但还会叫 昨天一天都是如此 但就是不叫了 抱它起来发现肚子处没毛了 然后带它去看了兽医 但人家说只会医狗 然后就带了回来了 隔了一小时去看它时发现腿直了 身体僵硬翻肚状 眼还没闭着 然后心情凝重的把它埋了 现在还剩一只 还算蛮精神 之前另外一只还在生的时候它们很喜欢一起缩在角落了依偎着对方 现在它好像很亢奋 一直叫个不停 水和饲料都给了还是这样不知道孤独还是怎样 也不知道继续留着好不好 我怕这个也走了
好可爱的小鸭子，真可惜伤心
刚觉得可爱，买了3只，是不是作孽了长大还是难逃被吃的命运么
刚买回来的小鸭子吃什么？我刚买了2只不会养
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